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液相色譜知識科普
一、什么是色譜呢?
色譜的本質是一種分離分析方法。常見的分離方法有蒸餾、離心、電泳、過濾等。色譜是目前有效的分離方法之一。
色譜法的原理：
利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解、分配、吸附等性質的差異，當兩相作相對運動時，使各組分在兩相中反復多次受到各作用力而達到相互分離。
兩相中有一相是固定的，叫作固定相(Stationary Phase)，有一相是流動的，稱為流動相(phase)，流動相又叫洗脫劑、溶劑。
相(Phase)：物理化學術語，特指在某一系統中，具有相同成分及相同物理、化學性質的均勻物質。各相之間有明顯可分的界面。
二、液相色譜儀的組成
1、輸液系統
包括溶劑柜、真空脫氣機、溶劑混合器、高壓泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足夠的驅動力使流動相通過填充緊密的色譜柱。
洗脫方式也分為兩種：
（1）等度洗脫：在同一分析周期內流動相組成保持恒定，適合于組分數目較少，性質差別不大的樣品。
（2）梯度洗脫：采用兩種（或多種）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續改變流動相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分數目多、性質差異較大的復雜樣品。
2、進樣系統
把分析試樣有效地送入色譜柱進行分離。一般有自動進樣器和手動進樣器，進樣量應不小于定量環體積的5-10倍（少3倍）。
3、分離系統
主要是色譜柱，色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等，其尺寸（內徑、長短）不盡相同；色譜柱填料主要有硅膠基質和聚合物基質，填料的粒徑不盡相同。
4、檢測器
對檢測器的要求：靈敏度高、重現性好、線性范圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。
示差檢測器是一種通用型檢測器，理論上可以檢測幾乎所有的化合物。其原理是基于含樣品的洗脫劑和洗脫劑二者折光指數的差異。示差檢測器受壓力變化、溫度變化、流動脈沖的影響較大，不適合進行梯度洗脫。
三、液相色譜儀操作流程
1、開機：依次打開脫氣機、色譜泵、檢測器、計算機電源；待各設備自檢正常后，啟動色譜管理系統。
2、流動相準備：過濾，脫氣。
3、色譜泵排氣
4、安裝色譜柱
5、平衡流動相（有機溶劑與緩沖鹽溶液切換時等易產生沉淀，需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動相沖洗系統）
6、數據采集、進樣
7、沖洗管路及色譜柱
8、數據處理
9、關機
10、記錄相關信息
四、液相色譜圖名詞術語
色譜峰(Peak):色譜柱流出組分通過檢測器時產生的響應信號。
峰底(Peak Base):峰的起點與終點之間連接的直線。
峰高(Peak Height):峰大值到峰底的距離。
切線峰寬(Peak Width):在峰兩側拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的距離。
半(高)峰寬(Peak Width at Half Height):通過峰高的中點作平行于峰底的直線，其與峰兩側相交兩點之間的距離。
峰面積(Peak Area):峰與峰底之間的面積，又稱響應值。