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液相色譜柱
液相色譜儀由高壓液體泵分離系統(tǒng)、檢測(cè)器及液相色譜柱（含柱溫控制系統(tǒng)）等三部分組成。其中液相色譜柱是液相色譜工作的關(guān)鍵，液相色譜柱的性能直接關(guān)系到分離分析的準(zhǔn)確性與適用性。
液相色譜柱的分類方法很多，可按鍵合相類型、用途（分析型與制備型）、基質(zhì)種類等進(jìn)行分類。
例如：
A:物理因素
1.硅膠純度 ----- 填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度
2.色譜柱尺寸---填料床的長(zhǎng)度和內(nèi)徑
3.顆粒形狀------球型或不規(guī)則型
4. 粒徑-----------平均顆粒直徑，通常3-10μm
5.表面積---------顆粒外表面和內(nèi)孔表面的總和，以m2/gram表示
6.孔徑------------顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍80-300Å;
B：化學(xué)性質(zhì)
1.鍵合類型----- 單體鍵合 - 鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連
2.碳覆蓋率------與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量
3.封端------------鍵合步驟之后， 用短鏈將的硅羥基鍵合后封閉起來(lái)
影響因素
1 、硅膠基質(zhì)柱（4大類）
目前，分析型液相色譜柱多為硅膠基質(zhì)柱，細(xì)分為：
高純硅膠柱：以硅烷化硅膠（Silica）為填料，應(yīng)用范圍較廣，但只能在PH2.0-7.5，小于60度的條件下使用。又由于強(qiáng)極性硅羥基（Si-OH)的次級(jí)保留效應(yīng)較強(qiáng)，所以應(yīng)用受到局限，已被鍵合相柱所取代。
反相硅膠柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，表面鍵合弱極性官能團(tuán)的固定相。目前多用C18（ODS）、C8（MOS）、C6H5（phenyl，苯基）等。用于分離大多數(shù)有機(jī)化合物，應(yīng)用范圍比較寬。
正相硅膠柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，表面鍵合極性官能團(tuán)的固定相。目前較多的為：NH2—（氨基）、CN—（氰基）、DIOL（二羥基，也常做HILIC單獨(dú)分類列出，多用于分離有機(jī)酸、蛋白質(zhì)等）。多用于分離光學(xué)異構(gòu)體和反相柱子不能分離的極性比較大的物質(zhì)。
離子交換柱：是以硅烷化硅膠為基質(zhì)，以磺化交聯(lián)鍵合強(qiáng)陽(yáng)/陰離子基團(tuán)（磺酸鹽/季銨堿）的固定相，又分為強(qiáng)酸性、強(qiáng)堿性、弱酸性、弱堿性等不同規(guī)格。用于分離解離性較強(qiáng)的有機(jī)鹽類化合物。（注意：不要同離子色譜混淆，離子色譜主要是分離無(wú)機(jī)鹽類化合物或某些帶點(diǎn)離子。）
2、聚合物基質(zhì)柱
聚合物基質(zhì)柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝膠作為主要填料的一類色譜柱。其相對(duì)于硅膠柱具有強(qiáng)的疏水性及寬泛的pH范圍（1.0～14.0），但柱效較低，目前主要應(yīng)用于凝膠滲透色譜（GPC）、凝膠過(guò)濾色譜（GFC）及分子排阻色譜（MEC）。主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物。
3、其他無(wú)機(jī)物填料柱
這類色譜柱只于特用途，主要有石墨化碳、氧化鋁（Al2O3）、氧化鋯（ZrO2）等填料。不需要進(jìn)行表面改性，其自身表面對(duì)多類化合物有強(qiáng)保留。可在任意pH（氧化鋁除外，不能大于12.0）及高溫度（可達(dá)100℃）下使用。其中，石墨化碳填料柱能分離多種化合物，主要用于分離幾何異構(gòu)體；氧化鋁柱剛，柱床穩(wěn)定，可分離多種化合物且多用于制備色譜；氧化鋯柱較氧化鋁柱有強(qiáng)的pH適用范圍及能耐受高的溫度，但其應(yīng)用尚待進(jìn)一步研究。
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。
1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受100純水且對(duì)極性化合物保留好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái)，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不用于其它實(shí)驗(yàn)）
3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等），他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng)，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是目前實(shí)現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價(jià)格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱