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液相色譜流動相使用時需要注意的壞習(xí)慣
液相色譜流動相使用時的壞習(xí)慣
先來了解下，流動相，色譜過程中攜帶待測組分向前移動的物質(zhì)稱為流動相。與固定相處于平衡狀態(tài)、帶動樣品向前移動的另一相。用作流動相的物質(zhì)有：氣體、液體、臨界流體等。常見的流動相主要有：乙腈-水溶液、乙腈-酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：
（1）流動相對樣品具有一的溶解能力，保樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
（2）流動相與樣品不產(chǎn)生，化學(xué)反應(yīng)
（3）流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離果；降柱壓降，延泵的使用壽命(可運(yùn)用提溫度的方法降流動相的黏度)。
（4）流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器， 好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
（5）流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
（6）在流動相配制好后，一要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微氣體既利于檢測，還可以止流動相中的量氧與樣品發(fā)生作用。
在流動相使用過程中有些所不為的習(xí)慣
1加入有機(jī)相之后再測量流動相的PH值
通常情況下測量流動相的PH值，是測量水相中的PH值參數(shù)。有機(jī)相加入之后PH值參數(shù)的測量就和之前有誤差。
PS：但如果能保每次測量都是加入相同量的有相之后得到的PH值，雖然這不能保確度，但是這能保前后一的測量結(jié)果，所以這樣也沒有問題。
2沒有進(jìn)行流動相的過濾、流動相的脫氣。
配制好的流動相在使用前一要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y發(fā)現(xiàn)的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。
碰到這種情況時，要換用經(jīng)過濾的流動相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。
流動相在使用前須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降，還能夠?qū)z測器的信號產(chǎn)生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮?dú)饷摎獾取Ｕ婵彰摎夥ê偷獨(dú)饬髅摎夥ㄊ悄壳俺Ｓ玫拿摎夥āＫ图状蓟旌虾髸a(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進(jìn)入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進(jìn)行。
3不使用緩沖鹽、沒有在正確的緩沖區(qū)間使用緩沖鹽
緩沖鹽的加入是用來控制和修正流動相中PH值的改變的。
樣品基質(zhì)、空氣中的CO2、水中的雜質(zhì)都會造成流動相PH值的改變，而PH值的改變會影響樣品的保留、峰形、峰面積參數(shù)。每個緩沖鹽都有一的緩沖范圍，在此范圍內(nèi)它提供了 佳的pH穩(wěn)定性。在這個范圍外，緩沖鹽在抵pH值變化方面是無效的。
所以要么在正確的范圍內(nèi)使用緩沖鹽，要么選擇一個緩沖范圍覆蓋所需pH值的緩沖鹽。
4向有機(jī)相中加入緩沖鹽
如果將水相的緩沖溶液加入到有機(jī)相中，會大大增加緩沖鹽析出的風(fēng)險(xiǎn)。
緩沖鹽的析出在初期可能并不顯，但會對儀器的各個部件都會產(chǎn)生一影響。
5梯度洗脫時直接用泵去混合流動相并且流動相比例從0 開始
現(xiàn)在的液相色譜能夠的進(jìn)行在線脫氣和流動相混合。但是將梯度洗脫比例從0 開始，會有比較大的出現(xiàn)氣泡和沉淀的風(fēng)險(xiǎn)。
6沒有使用正確的pH值修飾酸或堿作為緩沖液
緩沖溶液的修飾酸或堿，只使用生成緩沖鹽的酸或堿。例如，磷酸鈉緩沖液只能用磷酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)。
7沒有在方法中說明緩沖液的全信息
例如只在方法中寫“稱5克磷酸鈉溶入1000毫升水”。
緩沖鹽的類型決定其pH緩沖范圍，而緩沖鹽中所需物質(zhì)的濃度決定了緩沖強(qiáng)度。例如：5g的無水磷酸鈉和5g的一水磷酸鈉具有不同的緩沖強(qiáng)度，會影響保留率。
8使用儀器時不調(diào)查之前使用的流動相情況，直接用純有機(jī)溶劑沖系統(tǒng)
如果之前的方法在B通道使用緩沖溶液，而這次沒有經(jīng)過調(diào)查就直接在B通道使用了純的有機(jī)溶劑，那么就會造成該通道緩沖鹽析出、出現(xiàn)堵塞等風(fēng)險(xiǎn)。
9將溶劑瓶中的流動相用干為止
溶劑瓶中的流動相如果用干，未及時補(bǔ)充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，會導(dǎo)致儀器中出現(xiàn)氣泡等問題。
10色譜柱變干
忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一就不可救了。可以嘗試一種全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或多的時間被浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。