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基因敲除（knockout）是用含有一定已知序列的DNA片段與受體細(xì)胞基因組中序列相同或相近的基因發(fā)生同源重組,整合至受體細(xì)胞基因組中并得到表達(dá)的一種外源DNA導(dǎo)入技術(shù)。它是針對(duì)某個(gè)序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏蔽，并可進(jìn)一步對(duì)生物體造成影響，進(jìn)而推測(cè)出該基因的生物學(xué)功能。

靶向基因敲除技術(shù)是一種嶄新的分子生物學(xué)工具。研究發(fā)現(xiàn)，植物細(xì)菌Xanthomonas sp.的TAL蛋白的核酸結(jié)合域的氨基酸序列與其靶位點(diǎn)的核酸序列有恒定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。利用TAL的序列模塊，可組裝識(shí)別任意DNA序列的模塊化蛋白和重組核酸酶，在特定位點(diǎn)打斷目的基因DNA序列，進(jìn)而在該位點(diǎn)進(jìn)行DNA操作，如Knock-out、Knock-in或點(diǎn)突變。該技術(shù)克服了ZFN方法不能識(shí)別任意目標(biāo)基因序列，以及識(shí)別序列經(jīng)常受上下游序列影響等問(wèn)題，從而使基因敲除變得更加簡(jiǎn)單方便。目前已成功的應(yīng)用到細(xì)胞、酵母、植物、斑馬魚、小鼠、大鼠等模式生物中，大大縮減項(xiàng)目的研究周期。

TALEN技術(shù)特點(diǎn)：
1、無(wú)基因序列、細(xì)胞、物種限制，幾乎可敲除任意基因。
2、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)周期短、成本低。
3、毒性低、脫靶情況少；成功率幾乎可達(dá)*。
4、TAL的核酸識(shí)別單元與A、G、C、T有恒定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
5、可識(shí)別任意目標(biāo)基因序列，且不受上下游序列影響，具有ZFN相等或更好的活性。

TALEN靶向敲除小鼠短僅需4個(gè)月，無(wú)小鼠品系限制，成功率高達(dá)*，可在大鼠中進(jìn)行精確操作，非敲除致死造成的實(shí)驗(yàn)失敗，不收任何費(fèi)用。

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毓秀生物科技（上海）有限公司

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