CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)是繼TALEN基因編輯技術(shù)之后突破。該技術(shù)通過RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進(jìn)行特定DNA編輯
CRISPR cas9 基因編輯技術(shù)是繼TALEN基因編輯技術(shù)之后突破。該技術(shù)通過RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進(jìn)行特定DNA編輯。CRISPR-Cas9系統(tǒng)的基因敲除效率更高，Cas9系統(tǒng)的載體構(gòu)建與使用也更加便捷，并已應(yīng)用在各物種中，是目前使用廣泛的基因編輯技術(shù)。
CRISPR cas9 基因編輯編輯細(xì)胞：
CRISPR cas9 系統(tǒng)利用sgRNA/Cas9復(fù)合體識(shí)別并在DNA特異位點(diǎn)造成雙鏈斷裂，利用細(xì)胞自身修復(fù)機(jī)制或者與外源DNA同源重組實(shí)現(xiàn)基因敲、敲入和序列突變。
CRISPR cas9 基因編輯技術(shù)優(yōu)勢
操作簡單，靶向精確性更高；
可實(shí)現(xiàn)對多個(gè)靶基因位點(diǎn)或多個(gè)靶基因的同時(shí)敲除/敲入/突變；
適用于人、大鼠、小鼠以及部分其他哺乳動(dòng)物等各種細(xì)胞系的靶向敲除/敲入/突變。
CRISPR cas9 基因編輯模式動(dòng)物：
利用CRISPR cas9 基因編輯技術(shù)使動(dòng)物基因組發(fā)生可遺傳變異，現(xiàn)已廣泛用于基因編輯動(dòng)物建立。將體外轉(zhuǎn)錄的sgRNA和Cas9 mRNA或者體外翻譯的Cas9蛋白對小鼠/大鼠受精卵單細(xì)胞進(jìn)行胞質(zhì)或者原核顯微注射后，得到基因敲除、敲入或者定點(diǎn)突變的編輯鼠。
CRISPR cas9 基因編輯技術(shù)優(yōu)勢
專業(yè)團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)基因編輯方案；
配套完整、技術(shù)成熟、周期短、成功率高。
CRISPR cas9 基因編輯應(yīng)用方向
全身性敲除或條件性敲除大小鼠模型；
敲入性基因編輯大小鼠模型；
① 敲入GFP/RFP/LacZ等序列，標(biāo)記內(nèi)源基因
② 與基因組序列替換，引入點(diǎn)突變
成體鼠導(dǎo)入CRISPR cas9 基因編輯病毒（腺病毒或者腺相關(guān)病毒）進(jìn)行基因編輯。
CRISPR cas9 基因編輯技術(shù)優(yōu)勢
效率高：可精確編輯基因組，敲除效率高
周期短：構(gòu)建和使用極為方便，極大降低了實(shí)驗(yàn)難度，縮短實(shí)驗(yàn)周期
廣譜性：無基因、細(xì)胞及物種限制
多重編輯能力：可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行基因打靶
功能豐富：可實(shí)現(xiàn)敲除、插入、抑制、激活等多種目的基因
CRISPR cas9 基因編輯系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)的歷史：
1987年，在大腸桿菌的基因組中*發(fā)現(xiàn)了一個(gè)特殊的重復(fù)間隔序列——CRISPR序列，隨后，在其他細(xì)菌和古菌中也發(fā)現(xiàn)了這一特殊序列。
2005年，發(fā)現(xiàn)這些CRISPR序列和噬菌體的基因序列匹配度很高，說明CRISPR 可能參與了微生物的免疫防御。
2011年，CRISPR-Cas系統(tǒng)的分子機(jī)制被揭示：當(dāng)病毒*入侵時(shí)，細(xì)菌會(huì)將外源基因的一段序列整合到自身的CRISPR的間隔區(qū)；病毒二次入侵時(shí)，CRISPR 轉(zhuǎn)錄生成 前體crRNA (pre-crRNA)， pre-crRNA 經(jīng)過加工形成含有與外源基因匹配序列的crRNA，該crRNA與病毒基因組的同源序列識(shí)別后，介導(dǎo) Cas 蛋白結(jié)合并切割，從而保護(hù)自身免受入侵。
2013年，發(fā)現(xiàn)CRISPR cas9 基因編輯系統(tǒng)可高效地編輯基因組。隨后張鋒等使用CRISPR系統(tǒng)成功的在人類細(xì)胞和小鼠細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了基因編輯。
從此開始，CRISPR cas9 基因編輯技術(shù)給生命科學(xué)領(lǐng)域帶來了巨大沖擊，CRISPR cas9 基因編輯相關(guān)研究成果頻頻登上CNS等期刊，近兩年更是成為諾貝爾獎(jiǎng)熱門候選。
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