一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱    4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱    4T1-A；小鼠乳腺癌細(xì)胞

種屬來源    小鼠

組織來源    乳房

生長特性    貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)    上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞代數(shù)    10代以內(nèi)

背景介紹

4T1是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)注射到BALB/c 小鼠中時，4T1自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺，肝，淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶。誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。

4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近。這種腫瘤是人VI期乳腺癌的動物模型。4T1-誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。 跟其他腫瘤模型相比，由于4T1的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個)也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測到。

4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞    生物安全等級    1

致瘤性    Yes, forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

細(xì)胞規(guī)格    1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測    無

保藏機(jī)構(gòu)    ATCC; CRL-2539

培養(yǎng)基    90%DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件    氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件    無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞貨期    現(xiàn)貨，1周左右

運輸方式    復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞

供應(yīng)限制    僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明             以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

收貨方式    T25瓶    凍存管

收貨處理    觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)    收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇

傳代密度    細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)    第三天換液并檢查細(xì)胞密度

傳代比例    傳代建議1：2傳代

1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿    一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞    傳代方法

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml*培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL*培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞    注意事項

1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

2.因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰 亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。

1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存；

2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。

到貨須知

1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否*揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

3.由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

三、4t1小鼠乳腺癌細(xì)胞  細(xì)   胞凍存操作

凍存液配方    無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞密度    待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

凍存方法    a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項    凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

四、售后服務(wù)

重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)；

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)；

5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)；

6.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)；

7.視具體情況而定。

不予重發(fā)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；

5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；

7.視具體情況而定。