Stable
Stable Chemically Competent Cell
產品規格:

Stable感受態細胞基因型:

F' proA+B+ lacIq  ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)  ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15

e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

Stable感受態細胞簡要說明：

Stable 菌株是 NEB 公司開發的高轉化效率菌株，是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株，具有與 Stbl2，Stbl3 *不同的基因型，但是表現出比 Stbl2，Stbl3 更優異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復序列 DNA** 片段的克 隆。基因組含有重組酶 recA1 rel A1 突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；同時含有核 酸酶 endA1 突變，避免了提取質粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質粒的產量和質量。- -
-CMbio-lacZΔM15 的存在使 Stable 可用于藍、白斑篩選，此菌株具有四環素和鏈霉素抗性，Stable 感受態細 胞經特殊工藝制作，pUC19 檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。
Stable感受態細胞操作說明
1. Stable 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，6 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質粒或連接產物）并用手

 EP 管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置 25 分鐘。-CMbio-

2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 5 分鐘，晃動會降低轉化效率。-CMbio-

3. 向離心管中加入 0.9 mL 室溫 S.O.C.或 LB 培養基(S.O.C.營養豐富，可提高轉化效率)。-CMbio-

4. 37℃，225 rpm 復蘇 60 分鐘或 30℃，225 rpm 復蘇 90 分鐘。 (當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯 誤重組的概率，若轉化 control pUC19 計算轉化效率，則需 37℃，225 rpm 復蘇 60 分鐘）-CMbio-
5. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 S.O.C.或 LB 培養基 上。
6. 將平板倒置放于 37℃或 30℃培養箱過夜培養。 (當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率， 若轉化 control pUC19 計算轉化效率，則需 37℃培養過夜)。
Stable感受態細胞優點應用：
1. Stable 菌株與 Stbl3 相比，基因組含有 endA 突變，提高了病毒質粒的產量和純度。-CMbio- 2. Stable 菌株比 Stbl3 生長速度快，倍增時間是 Stbl3 的 1.5 倍。-CMbio-
3. . Stable 菌株基因組中含有 fhuA 突變，賦予其對噬菌體 T1 的抗性。-CMbio-

4. Stable 菌株具有較高的轉化效率，pUC19 檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。

5. Stable 菌株基因組中含有 lacZΔM15，可用于藍白斑篩選實驗。-CMbio-

6. Stable 菌株特別適合于不穩定 DNA 的克隆，及逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建和擴繁。
Stable感受態細胞注意事項：

1. 對不穩定 DNA 的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在 30℃培養，以減少發生錯誤重組的 概率。-CMbio-
2. 制備高純度病毒質粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質粒，菌液不可低溫保存后使用。

3. 對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存，盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。-CMbio-

4. 感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中 10 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降

低轉化效率。混入目的 DNA 時應輕柔操作。-CMbio-

5. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。-CMbio-