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上海淳麥生物科技有限公司

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電轉化感受態細胞

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產品型號EHA105

品牌其他品牌

廠商性質生產商

所在地上海市

更新時間:2024-12-23 20:45:02瀏覽次數:918次

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上海淳麥生物科技有限公司在感受態細胞的研發方面,實力雄厚,擁有了克隆、表達、酵母和農桿菌4大類,共計百余種感受態細胞。在電擊感受態方面,擁有了大腸桿菌 電轉化感受態細胞和農桿菌電擊感受態種類,極大提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率。

EHA105農桿菌電轉感受態細胞簡要說明:
  EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ,此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti質粒含有篩選標簽:strep,賦予EHA105菌株鏈霉素抗性,適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。
開發的EHA105電轉感受態特別適用于大質粒的轉化:經pCAMBIA2301質粒(size:11633bp)檢測轉化效率可達5×104cfu/μg;經pCAMBIA2301-ZH質粒(size:40kd)檢測轉化效率可達5×103cfu/μg。

EHA105農桿菌電轉感受態細胞操作說明:
1. 0.2cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5ug質粒DNA(質粒體積不大于6ul,應該用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手輕輕敲打管底混勻,立即插入冰中,用200ul槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中,蓋上杯蓋,空管保留待用。
3.啟動電轉儀,設置參數:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此參數為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700ul 無抗生素的LB并轉移到感受態空管中,28℃振蕩培養2~3小時。
4. 6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天(當平板只含有50ug/ml kan 時,28℃培養48h即可;平板中同時加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 時,需28℃培養60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養72-90h)。

農桿菌感受態細胞

農桿菌感受態細胞上海淳麥生物科技有限公司在感受態細胞的研發方面,實力雄

EHA105感受態細胞

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