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重組蛋白表達是一種將外源基因導入到宿主細胞中,獲得大量可控制的蛋白質表達的技術。這項技術在生物醫藥研究、工業生產和農業領域都有廣泛的應用。蛋白表達技術可以通過多種方法進行檢測和確認。其中,Western blotting、ELISA、質譜等是常見的定量和質量分析方法。此外,X射線晶體學和核磁共振等技術可用于解析蛋白結構,有助于更深入地了解蛋白功能。
首先,重組蛋白表達技術的實現需要利用載體將目標基因轉化到宿主細胞中,其中包括原核細胞和真核細胞兩個主要類型。常見的載體有質粒、病毒和人工染色體等。質粒是最為常用的載體之一,因其操作簡單、轉化效率高且對宿主細胞影響小而備受歡迎。
其次,在進行蛋白表達前,需考慮如何優化表達系統,以提高表達量和純度。常用的優化方法包括選擇合適的啟動子、信號肽和引物,調整培養溫度、補充營養成分、添加誘導劑等。此外,還需采用合適的萃取和純化方法去除雜質,保證獲得高質量的重組蛋白。
在實際應用中,重組蛋白表達技術被廣泛應用于生物醫藥領域,例如合成重組疫苗、獲得治療性蛋白等。在工業生產領域,該技術可用于生產高價值產品,如酶制劑、抗體、單克隆抗體等。此外,在農業領域,可利用重組蛋白技術改良作物品質、提高產量、增加耐旱能力等。