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采用單四極桿液質聯用技術高效快速檢測醫美樣品中的氨基酸
閱讀：149 發布時間：2025-2-25前言水光針是一種無創、無痛的微針美容項目，其主要成分通常包含透明質酸鈉、氨基酸和維生素等。成年人在皮膚表層注射這些活性成分，可實現暫時性補水，并改善皮膚干燥、膚色暗沉等面部問題。水光針中添加氨基酸的主要作用是增強對肌膚的保濕和修復，而氨基酸的含量直接影響產品的效果。因此準確測定水光針產品中的氨基酸非常重要。由于氨基酸結構中不含紫外吸收官能團，因此無法直接通過常規紫外檢測器進行檢測。目前很多標準中氨基酸的檢測主要采用衍生法，即，首先使用衍生化試劑（一般是 OPA、FMOC 等有紫外吸收的化合物）在堿性條件下對氨基酸進行衍生，得到具有紫外吸收能力的衍生物，然后用紫外檢測器或者熒光檢測器進行檢測[1-3]。這種方法操作步驟相對復雜，且可能受到基質干擾。也有標準方法利用液相色譜-串聯質譜聯用系統直接進行檢測[4]，雖然能夠減小基質干擾，提高選擇性，但檢測成本較高，不適用于對醫美產品的生產進行監控。本研究采用液相色譜串聯單四極桿質譜系統，開發出一種能夠快速準確地分析三種氨基酸的方法，一針運行只需11min。與先前報道的衍生法相比，本文所述的方法無需衍生步驟，操作比較簡單；并且該方法抗基質干擾能力較強，具有較高的靈敏度。
實驗部分試劑和樣品甲醇、乙腈為色譜級，均購自安譜公司；乙酸銨為色譜級，購自Sigma公司；實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統現制備的高純去離子水；氨基酸標準品及水光針樣品由用戶提供。儀器和設備采用與 Agilent InfinityLab LC/MSD iQ（部件號 G6160A）聯用的 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統，該色譜系統配備如下安捷倫組件：Agilent 1260 Infinity II 四元泵（部件號 G7111B）、Agilent 1260 Infinity II 自動進樣器（部件號 G7129A）和 Agilent1260 Infinity II 柱溫箱（部件號 G7116A）。標準溶液制備分別稱取適量脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸標準品，溶于甲醇中，配制得到濃度為5500μg/mL的標準儲備液；然后用甲醇進一步稀釋，配制得到濃度分別為 1、5、10、20、40μg/mL的系列標準溶液。
樣品前處理取適量水光針樣品，用甲醇稀釋 10 倍，離心后，取上清液進樣分析。色譜條件色譜柱： Amide色譜柱，4.6×150mm,3.5μm流速： 0.6mL/min進樣量： 10μL柱溫： 30 °C流動相 A： 水流動相 B： 乙腈流動相 C： 0.2mol/L乙酸銨水溶液梯度程序（如表 1）：
結果與討論本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯單四極桿質譜系統建立了脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的檢測方法（如圖 1）。使用該方法條件檢測三種氨基酸，在各自特征離子的 SIM 掃描下，獲得了較高的靈敏度，相互之間為干擾，有良好的專屬性。同時，該方法運行時間僅需要11min，能夠快速完成大批量的樣品分析，獲得較高的樣品分析效率。
方法精密度取“標準溶液制備"項下的20μg/mL脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸混標溶液，重復進樣 6 次，計算所得到的保留時間和峰面積相對標準偏差 (RSD)，結果如下（如表 3）。從表中可以看出，三種氨基酸的保留時間 RSD 均小于 0.02%，峰面積 RSD 均小于 1.0%，表明該方法具有較高的精密度。
靈敏度利用所開發的方法對1μg/mL混合標準溶液進行分析，結果如下（圖 2）所示。此濃度下的脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的信噪比分別為2456、2336 和 1061。以此濃度及信噪比計算檢出限和定量限，三種氨基酸的結果如下：以 3 倍信噪比作為檢出限，則脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸的檢出限分別為1.2ng/mL、1.3ng/mL、2.8ng/mL。以 10 倍信噪比作為定量限，則脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸的檢出限分別為4.1ng/mL、4.3ng/mL、9.4ng/mL。上述結果表明，采用該方法測定該類型樣品中的三種氨基酸具有較高的靈敏度。
結論本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯單四極桿質譜系統，建立了醫美類樣品中脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的檢測方法。傳統氨基酸測試方法一般采用柱前或柱后衍生的方式，需要用到特殊的衍生試劑、專用的色譜柱及流動相體系等，方法的復雜性較高，結果的重復性以及穩定性也存在一定的問題。本方法與傳統的氨基酸衍生法相比屬于直接測定方法，不存在衍生操作，具有操作簡便、選擇性好和靈敏度高的特點，非常適合醫美類實際樣品中氨基酸的準確定量。