轉印儀為從組織培養細胞制備純化完整RNA提供了一種快速而簡便的技術;1小時內總RNA可通過兩塊96孔ScreenPlate得以提純;在純化過程中無需苯酚或乙醇沉淀,終RNA制備過程中無可檢測的DNA酶污染。
轉印儀使用簡便,操作快捷,1小時即可完成
1、插上半干轉印儀的電源,打開儀器開關,用雙手按住儀器兩段的上面的按鈕,手指向上抬,拿下半干轉印儀上面的陽極電極板。
2、Tris/甘氨酸-SDS-PAGE結束后,取出凝膠,在Tris/甘氨酸緩沖液中漂洗數秒。取凝膠方法:用刀片將兩玻璃板分開,將多余的凝膠劃去,上部以濃縮膠為準全部棄去,下部以分子量標準小分子帶下一點全部劃去,取一10ml注射器注滿轉印緩沖液,插入玻璃板與凝膠之間注水,使水的壓力將兩者自然分開,邊推邊進,反復多次注水,直至凝膠從玻璃板上滑落下來。
3、將NC膜和濾紙切出與凝膠一樣大小,置轉移緩沖液中濕潤5-10min、
4、按照以下順序放置濾紙,凝膠和NC膜到半干槽中。
5、每層之間的氣泡要全部去除。可以用10ml吸管輕輕在上一層滾動去除氣泡,然后用*緣的塑料片中間挖空與凝膠一樣大小或略小一點,以防電流直接從沒有凝膠處通過造成短路,蓋好加上陽極電極板。
6、按下set鍵,設置轉印的時間及電壓,確定后儀器開始運行。
7、轉膜結束后,將膜取下封閉,關掉電源開關,拔下電源,并清潔半干轉印儀。
注意在操作過程中要按照電源線顏色將電泳儀插在電泳儀上,否則蛋白印跡不會被轉到NV膜或是PVDF膜上。