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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 |
|---|
產品介紹
產品參數
| 產品貨號 | 產品名稱 | 規格 |
| 64AKSPEH | HTRF AKT P-S473 KIT | 10K PTS |
| 64AKSPEY | HTRF AKT P-S473 KIT | 50K PTS |
磷酸化 AKT（Ser473）試劑盒旨在穩定且高效地監測所有亞型的 AKT 在 Ser473 位點的磷酸化，作為 PI3K 通路激活的讀出指標。AKT 也被稱為蛋白激酶 B（PKB），是一種癌基因，控制細胞凋亡、細胞增殖、轉錄、細胞遷移和葡萄糖代謝。
產品特點
工作原理：
磷酸化 AKT（Ser473）檢測原理：
磷酸化 AKT（Ser473）檢測用于測量在 Ser473 位點磷酸化的 AKT。與蛋白質印跡法不同，該檢測基于微孔板，不需要凝膠、電泳或轉膜。磷酸化 AKT（Ser473）檢測使用兩種標記抗體，一種帶有供體熒光團，另一種帶有受體。第一種抗體因其對蛋白質上磷酸化基序的特異性結合而被選擇，第二種抗體因其能夠識別不依賴于其磷酸化狀態的蛋白質的能力而被選擇。蛋白質磷酸化使得涉及兩種標記抗體的免疫復合物形成，這使供體熒光團與受體緊密接近，從而產生熒光共振能量轉移（FRET）信號。其強度與樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度直接成正比，并在無需洗滌的檢測形式下提供了一種評估蛋白質磷酸化狀態的方法。
磷酸化 AKT（Ser473）雙板檢測方案：
雙板方案涉及在 96 孔板中培養細胞，然后進行裂解，接著將裂解物轉移到 384 孔低體積檢測板中，之后加入磷酸化 AKT（Ser473）檢測 HTRF 檢測試劑。該方案能夠監測細胞的活力和融合度。
磷酸化 AKT（Ser473）單板檢測方案：
使用 HTRF 試劑檢測磷酸化 AKT（Ser473）可以在一個用于培養、刺激和裂解的單板上進行。無需洗滌步驟。這個為高通量篩選設計的方案能夠實現微型化，同時保持強大的 HTRF 質量。
檢測驗證：
在 HEK 293 細胞上進行的磷酸化 AKT（Ser473）檢測 IGF 劑量反應：
在使用三種細胞密度（每孔 12,500 - 25,000 - 50,000 個細胞）接種的 HEK 細胞上獲得的結果。在饑餓 24 小時后，用各種濃度的 IGF 刺激細胞 10 分鐘。使用雙板檢測方案在 3.5 小時后測量磷酸化 AKT。
用總 AKT 來控制 AKT（Ser473）的磷酸化狀態。
使用磷酸化 AKT（Ser473）和總 AKT 檢測的雙板檢測方案，用 IGF-1 激活 HEK293 細胞（每孔 100,000 個細胞）10 分鐘。正如預期的那樣，獲得的結果顯示在 IGF-1 刺激下 AKT 磷酸化呈劑量反應性增加，而 AKT 的表達水平保持恒定。
簡化的通路：
AKT 簡化通路：
AKT（或蛋白激酶 B）在控制存活和凋亡中起著關鍵作用。這種絲 / 蘇蛋白激酶由胰島素和各種生長和存活因子調節，在涉及 PI3 激酶的渥曼敏感通路中起作用。當 AKT 的 Pleckstrin 同源（PH）結構域與磷酸肌醇結合時，AKT 可以被兩種不同的激酶磷酸化，PDK1 在蘇 308 位點和 mTORC2（哺乳動物雷帕霉素靶蛋白）在絲 473 位點，從而開啟 AKT 的激活。
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