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細胞的3D家園—埃澤思基質膠系列

2024-12-27  閱讀(25)

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基質膠的概念

基質膠是一種模擬細胞外基質的生物材料,它能夠為細胞提供必要的支持和信號,影響細胞的行為和功能。它是從富含胞外基質蛋白EHS (Engelbreth Holm Swarm)小鼠腫瘤中提取的可溶性基底膜制備物,幾乎包含所有的基底膜成分,能良好模擬基底膜細胞外基質的生物學特性,為生命科學研究中多種實驗模型的構建提供關鍵生物材料,是類器官培養的重要載體。

基質膠主要成分為層粘連蛋白,Ⅳ型膠原蛋白,巢蛋白。同時,基質膠也包含多種生長因子,例如表皮生長因子EFG,血小板衍生生長因子PDGF,神經生長因子NGF,堿性成纖維細胞生長因子FGF-2,乙型轉化生長因子TGF-beta和胰島素樣生長因子ILGF。




基質膠的應用原理


細胞生長環境:基質膠為細胞提供一個支撐和生長的環境,促進細胞貼壁和生長。


影響基因表達:基質膠能夠影響成年大鼠肝細胞基因表達,為研究細胞生物學機制提供重要手段。


促進血管生成: 基質膠在血管生成實驗中發揮關鍵作用,有助于研究新血管的形成機制。









基質膠的制備方法


EHS小鼠腫瘤提取: 基質膠是從富含胞外基質蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取的可溶性基底膜制備物。


層析技術: 基質膠的制備通常涉及層析技術,確保其成分的純度和生物活性。




基質膠的市場前景


全球市場規模擴大: 基質膠市場的規模持續擴大,主要得益于生物技術的飛速發展。


實驗研究需求: 隨著實驗研究的不斷增多,對基質膠的需求也在日益增長。




基質膠在細胞生物學中的應用



01

干細胞的研究

干細胞培養: 基質膠為干細胞培養提供理想的生長環境,促進干細胞的分化和增殖。

組織工程: 基質膠在干細胞組織工程中發揮關鍵作用,有助于構建功能性組織。

02

代謝及毒理研究

代謝研究: 基質膠在代謝和毒理學研究中應用廣泛,有助于揭示細胞代謝機制。

藥物篩選: 基質膠為藥物篩選提供重要的細胞模型和研究工具。

03

細胞侵襲實驗

Transwell細胞體外侵襲實驗: 基質膠在Transwell細胞體外侵襲實驗中發揮關鍵作用,有助于研究細胞侵襲機制。

腫瘤細胞侵襲試驗: 基質膠在開發某些腫瘤細胞侵襲試驗中發揮重要作用,為腫瘤研究提供重要支持。






基質膠在其他實驗領域中的應用



01

血管生成實驗

血管生成機制研究: 基質膠在血管生成實驗中發揮關鍵作用,有助于研究新血管的形成機制。

藥物開發: 基質膠為血管生成藥物開發提供重要的實驗模型和研究工具。

02

類器官體外3D培養

類器官培養: 基質膠為類器官體外3D培養的研究提供理想的生長環境,促進類器官的發育和功能。

疾病模型: 基質膠在構建疾病模型中發揮關鍵作用,有助于揭示疾病的發生機制。

03

神經再生研究

周神經再生: 基質膠在體內外周神經再生研究中發揮重要作用,為神經再生研究提供重要支持。

神經損傷修復: 基質膠為神經損傷修復研究提供重要的實驗工具和模型。

04

教育與科研

教育應用: 基質膠在教育和科研中應用廣泛,為培養科研人才和推動科學發展提供重要支持。

科研合作: 基質膠為科研合作提供重要的實驗工具和模型,促進科學研究的深入和創新。




基質膠常見分類及推薦應用


根據不同的應用需求,基質膠有多種類型,每種類型都具有其特定的特點和推薦應用。以下是基質膠的一些常見分類及其推薦應用:

01

標準型基質膠:

特點:含有豐富的生長因子,如表皮生長因子、血小板衍生生長因子等。

推薦應用:常規的細胞實驗,如2D和3D培養,細胞侵襲、遷移實驗等。

02

低生長因子基質膠:

特點:生長因子含量減少,減少了細胞生長和分化的促進作用。

推薦應用:對基質成分要求嚴格的實驗,如細胞信號通路和細胞因子等的研究。

03

高濃度基質膠:

特點:蛋白濃度較高,有助于研究血管生成、腫瘤細胞遷移和體內腫瘤模型的建立等。

推薦應用:研究血管生成、腫瘤生長和體內應用研究,如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。

04

無酚紅基質膠:

特點:不含酚紅,適合需要進行熒光檢測或顯色反應等分析的實驗。

推薦應用:熒光檢測或顯色反應等分析。

05

人胚胎干細胞專用基質膠:

特點:經過對人胚胎干細胞培養的測試,適合人胚胎干細胞的培養。

推薦應用:人胚胎干細胞的培養和研究。

06

類器官用基質膠:

特點:適合用于類器官的培養,模擬體內環境,支持細胞的三維生長。

推薦應用:類器官的培養,如器官芯片和疾病模型研究。

這些基質膠類型各有特點,選擇合適的基質膠類型可以大大提高實驗的成功率和數據的可靠性。在實際應用中,應根據實驗的具體需求選擇合適的基質膠類型。




埃澤思基質膠產品系列

類器官基質膠產品





產品產品貨號規格應用場景
標準型-基質膠AC-10010815mL細胞生長、分化、形態研究、細胞化學功能、細胞遷移/侵襲等。
標準型低生長因子基質膠AC-10010825mL適用于對基質成分要求嚴格的實驗。如細胞信號通路和細胞因子的研究等。
高濃度-基質膠AC-10010835mL適用于研究血管生成、腫瘤細胞遷移和體內腫瘤模型的建立等。
高濃度低生長因子基質膠AC-10010845mL適用于研究血管生成、腫瘤細胞遷移和體內腫瘤模型的建立等。
保存條件:≤-10℃保質期:36個月



產品優勢

01

AC-1001081 標準型-基質膠

① 多功能性: 適用于多種實驗類型,包括腫瘤類器官藥敏實驗、血管生成實驗和神經軸突3D生長實驗,滿足不同研究需求。

② 快速凝固: 在37°C下迅速凝固,為細胞提供穩定的三維支架環境,有助于快速實驗設置和高效實驗結果獲取。

③ 優質基質支持: 提供穩定且富含生物活性的環境,支持類器官的快速形成和神經軸突的生長,確保實驗結果的可靠性和再現性。

02

AC-1001082 標準型 低生長因子基質膠

① 低生長因子含量: 減少外源性生長因子對實驗的干擾,提供一個相對穩定的微環境,有助于精確研究細胞特定的反應。
② 優化類器官培養: 專為類器官培養設計,提供適宜的細胞支持環境,促進類器官的形成和生長。

③ 一致性和穩定性: 產品成分一致,確保每批實驗的可重復性和穩定性,適合長期實驗使用。

03

AC-1001083 高濃度-基質膠

① 高濃度配方: 提供更堅固的三維結構支架,支持細胞在體內外的穩定生長,特別適用于免疫缺陷小鼠成瘤實驗。
② 增強細胞支持: 高濃度基質增加細胞與基質的相互作用,促進細胞的附著、擴增和成瘤能力。

③ 適應性廣: 可用于多種腫瘤細胞系,支持不同類型實驗的需求,尤其是需要更強支持的實驗設計。

04

AC-1001084 高濃度 低生長因子基質膠

① 雙重優化: 結合高濃度和低生長因子配方,適用于需要穩定支持且避免外源性生長因子干擾的實驗,特別適合免疫缺陷小鼠成瘤實驗。

② 高效成瘤: 在成瘤實驗中提供增強的細胞支持,確保成瘤效率和實驗的可重復性。

③ 減少實驗變量: 低生長因子含量減少了實驗中的干擾因素,有助于更精確的實驗結果分析。


實驗操作



01

腫瘤類器官藥敏實驗(操作所需時間為2小時)

① 將擴增好足夠是的腫瘤類器官(實驗組)以及正常類器官(對照組)用4℃預冷的基礎培養基進行重懸,緩慢機械吹打,促進膠液化溶解,并保持類器官結構完整(可用于懸浮培養于有5%基質膠溶液的基質膠表面)(Guillen al. 2022)。或者通過TryplE酶消化獲得單細胞懸液。

② 離心收集類器官細胞,并進行細胞計數。

③ 加入AppliedCell®基質膠原液,與細胞進行混勻。

④ 將細胞與膠的混合物,通過排槍加入37℃預熱過的96孔板或者384孔板,立即將孔板放入培養箱。

⑤ 大約10min后,AppliedCell®基質膠將凝固,加入相應體積的類器官培養液進行培養。

⑥ 類器官形成后(如果是機械吹打,類器官將在傳代24h后就會形成;如果是酶消化,類器官會在3-5天后形成),每個孔分別加入含有PI染料以及不同種類、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。

⑦ 在高內涵顯微鏡上進行活細胞成象,測定腫瘤類器官對各種藥物的敏感性。

02

血管生成實驗(以永生化HUVEC細胞系為例,操作所需時間為1小時)

① 將培養基換成饑餓細胞用培養基:加入含0.2%FBS,2mM L-谷氨酰胺,1mM丙酮酸鈉,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的DMEM培養基培養24小時。

② 將AppliedCell®基質膠均勻鋪滿96孔板底。注意:槍頭需提前預冷半小時。盡量在冰上操作,避免基質膠過早固化,避免氣泡產生。

③ 將96孔板在細胞培養箱孵育30min,固化基質膠。

④ 消化HUVEC細胞,并計數。

⑤ 將200μL的HUVEC細胞懸液(含5X10^4個細胞)加于含基質膠的96孔板中。將96孔板放于培養箱。

⑥ 血管樣網絡結構將于3至12小時間形成。

⑦ 在血管網絡形成最佳時間,小心去除培養基,并用加入含活細胞染料1/1000 Calcein AM(綠色)的培養基進行染色,并用顯微鏡進行拍照記錄。

03

神經軸突3D生長實驗(以大鼠胚胎神經干細胞為例,操作所需時間為2小時)

① 取孕期12-15天的大鼠胚胎,用眼科剪和眼科攝分離出大腦皮層于4°C預冷的DMEM培養基中。

② 用吸管輕緩吹打,然后用70μm濾網過來,獲得單細胞懸液,并進行細胞計數。

③ 離心(300g,3min),棄上清。將細胞與AppliedCell®基質膠進行混合,然后將基質膠混合物滴加在24孔板中,每孔50μl。

④ 將24孔板放于培養箱,大約10min后,Applied Cell®基質膠將凝固。加入1mL神經元分化培養基:Neurobasal medium,2%B27,2mM L-glutamine,5%FBS,20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF, 100U/mL penicillin 和100 μg/mL streptomycin。第二天開始,就能觀索到有明顯的神經軸突生長。

⑤ 在第7天可觀察到大量的神經突(Neurite)長出。


注意事項

AppliedCell®基質膠在溫度高于10℃時就會開始凝固成膠,所以盡量在冰上操作基質膠。

類器官傳代時,如果為了避免酶對類器官造成影響,可直接用4℃預冷的基礎培養基對基質膠進行緩慢吹打,即可將類器官從基質膠中釋放出來。




埃澤思即用型基質膠




產品介紹

AC-1001007 即用型基質膠

AC-1001097 Ready to Use Vtn

規格:100mL

保存條件:2~8℃,冰袋運輸

保質期:12個月


用于培養板表面包被,為干細胞(ES/iPS)、心肌細胞等多種細胞提供貼壁基質。

產品優勢

* 性質穩定,可在4℃儲存

* 省掉多個準備步驟(冰凍、解凍、稀釋),節省時間,提供實驗效率


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