單細胞鋪板手法一:均勻單層。要鋪成那種很均勻的單層細胞,手法如下:
1,細胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基,放入孵箱中放置10-20min。
2,在滴入細胞時,細胞板子與通風櫥有一定的角度,沿著板壁的孔邊緣滴入。
3,滴入后,呈“8”字方法搖晃5-8次。
4,置于水平臺上,放置10-20分鐘
5,放入孵箱。在細胞鋪板時,每一種板子的孔面積有多大,培養(yǎng)的液體量以及加入細胞量。
手法二:中間少,周圍多。其實細胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻,比如,做免疫熒光時,學霸姐姐喜歡鋪中間少,周圍稍多的板子,因為這個樣子可以同時檢測到單個細胞的形態(tài),另外又可以照一點低倍的用作于統(tǒng)計,所有的細胞都在一個環(huán)境中。
要鋪這樣的細胞樣子,那鋪細胞時要注意手法了:
1,細胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗,直接從邊上滴入混有細胞的培養(yǎng)基。
2,放置30s-1min后,前后搖晃5-8次。
3,放在水平臺上靜置2-5min。
4,放入孵箱。
其實在單細胞鋪板的時候,你要準確的知道你所養(yǎng)的細胞的特性,比如:
1,細胞的名稱,來源。2,細胞的屬性。3,細胞分裂時間。
細胞鋪板后,細胞狀態(tài)不好怎么辦?
如果出現(xiàn)這種情況,學霸姐姐建議你從以下幾個方面考慮一下原因:
1,用來鋪板的細胞狀態(tài)本身就不好。2,用來鋪板的細胞傳代次數(shù)太多,有些老化。3,胰酶消化時間過長。4,中和的血清量及時間不夠。5,支原體污染。
細胞鋪板是一個經(jīng)驗積累的過程,你的手法也需要積極的改進,不要生搬硬套,也不要一味追求的鋪均勻,在實驗過程中多思考細胞本身的特征和屬性,出現(xiàn)問題積極解決即可。