146368-16-3,水溶Cy3 NHS,水相反應標記熒光染料

    氨基活性sulfo-Cyanine3 NHS ester。不需有機溶劑，在水溶液中即可有效的對蛋白和多肽進行標記。該產品是低溶解度蛋白和易變性蛋白的理想選擇。這是一種磺化的、親水的、水溶的熒光染料。沒有磺化的Cyanine3 NHS ester亦可供選擇。該產品是Cy3® NHS ester的衍生物。在所有應用中Sulfo-Cyanine3 NHS ester都可以替代Cy3®，Alexa Fluor 546和DyLight 549。

    氨基活性sulfo-Cyanine3 NHS ester。不需有機溶劑，在水溶液中即可有效的對蛋白和多肽進行標記。該產品是低溶解度蛋白和易變性蛋白的理想選擇。
這是一種磺化的、親水的、水溶的熒光染料。沒有磺化的Cyanine3 NHS ester亦可供選擇。
    該產品是Cy3® NHS ester的衍生物。在所有應用中Sulfo-Cyanine3 NHS ester都可以替代Cy3®，Alexa Fluor 546和DyLight 549。

 

一般特性

外觀:	dark red crystals
分子量:	735.80
分子式:	C34H38N3NaO10S2
溶解性:	very high in water, good in polar organic solvents (DMF, DMSO)
質量控制:	NMR 1H (95%) and 13C, TLC, functional testing
儲存條件:	Storage: 24 months after receival at -20°C in the dark. Transportation: at room temperature for up to 3 weeks. Avoid prolonged exposure to light. Desiccate.

 

光譜特性

大激發波長, nm:	548
在大激發波長下的消光系數, Lmol-1cm-1:	162000
大發生波長, nm:	563
熒光量子產率:	0.1
CF260:	0.03
CF280:	0.06

Cyanine3 NHS ester和多克隆抗體的連接實驗方法和步驟

【準備材料】：

Cy3 NHS ester purchased from xi an ruixibio

anti-GST多克隆抗體purchased from Abcam

【實驗步驟】：

1.      在1 L 0.15 M NaCl 溶液中透析anti-GST抗體(濃度為 0.5 mL at3 mg/mL)，常溫透析4小時。

2.      在4°C用新鮮的1 L 0.15 M NaCl 溶液再透析過夜。

3.      第二天用1 L 0.1 M NaHCO3 (pH 8.3)透析4小時。

4.      用0.22 μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。

5.      用0.1 M NaHCO3 稀釋少量的抗體，在280nm處測其紫外吸收值計算標記抗體的總量 (IgG antibody摩爾吸光系數170 000 M-1 cm-1 at 280 nm).

6.      用DMSO配置Cy3 NHS (MW 616.19)溶液濃度為10 mg/mL;計算所需體積以得到想要的Cy3NHS 和抗體的比值(例如20:1)，然后慢慢將其加入到抗體溶液中，同時在暗處常溫緩慢攪拌45分鐘。

7.      用1 L 0.15 M NaCl 溶液常溫避光透析4小時除去未標記上的Cy5。

8.      在4°C用新鮮的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析過夜。

9.      用1 L of 0.01 M PBS/ 0.01% NaN3溶液常溫避光透析4小時, 在4°C常溫避光再次透析過夜。

10.  用0.22 μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。

11.  用0.01 M PBS/0.01 % NaN3整數倍稀釋標記抗體溶液，測量280nm(蛋白)和552nm(Cy)處的紫外可見吸光度。

12.  產品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/ 0.01% NaN3溶液中，-20℃避光儲存。
 

F/P計算：

Cy3在552nm摩爾吸光系數為150 000M-1 cm-1;此蛋白在280nm的摩爾吸光系數為170 000 M-1 cm-1;

不同蛋白的摩爾吸光系數不一樣;.Cy3染料本身在280 nm 的吸收是552nm處的8%。按以下公式計算F/P

值。

[Cy3] = A552/150000

[antibody] = {A280 - (0.08×A552)}/170000

F/P final= [Cy3]/[antibody]= {1.13×A552}/{A280 - (0.08×A552)}

 

供應商：陜西新研博美生物科技有限公司

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其它N-羥基琥珀酰亞胺脂Dye NHS esters染料：

Pyrenebutyric acid NHS ester

ROX NHS ester, pure 6- isomer

BDP FL NHS ester

FAM NHS ester

Cyanine3 NHS ester

Cyanine3.5 NHS ester

Cyanine5 NHS ester

Cyanine5.5 NHS ester

Cyanine7 NHS ester

Cyanine7.5 NHS ester

Sulfo-Cyanine3 NHS ester

Sulfo-Cyanine5 NHS ester

sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester

Sulfo-Cyanine7 NHS ester