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上海吉至生化科技有限公司
主營產品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
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2021-11-19 閱讀(279)
實驗步驟：
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸鹽緩沖液中，并計算溶解的毫摩爾數。如果蛋白含有不恰當的緩沖液（如Tris或者甘氨酸），可以通過在PBS中透析或濃縮的方法除去。計算：蛋白質量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白質的毫摩爾數。
2. 在打開之前，平衡生物素至室溫。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超純水中，加入足夠量濃度的生物素，一般對于10 mg/ml 蛋白來說超過12倍分子數，對于2 mg/ml 蛋白溶液應超過20倍，或者該試劑也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室溫30分鐘，或冰上放置2小時。
4. 用30 ml PBS預洗純化柱，上樣，加入與欲收集量相同的緩沖液，收集0.5 ml 或1 ml 于單獨的管中。
5. 以280 nm 的吸收值測定蛋白含量。
6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用，可加入疊氮鈉、甘油等保存。
