使用方法
一、 樣本處理:
1. 血清(漿):直接檢測,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。
2. 培養液樣本:吸取培養液,1000轉/分,離心10min,取上清進行檢測。
注:一般建議細胞密度在106個/ml以上。
3. 組織樣本:
準確稱量組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9的比例,加入9倍體積的勻漿介質,冰水浴下機械勻漿,2500轉/分,離心10min,取上清進行檢測。
注:A.如組織樣本不存在高脂樣本,勻漿介質統一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH7.4)或生理鹽水進行提取;
B.如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質統一用無水乙醇進行提取。
4. 細胞樣本:
a、取適量的細胞(一般推薦>106以上),1000轉/分,離心10min,棄上清,留細胞沉淀。
b、用等滲緩沖液(PBS或生理鹽水)清洗1~2次,1000轉/分,離心10min,棄上清,留細胞沉淀。
c、加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿,冰浴條件下超聲破碎細胞,功率300W,每次3~5s,間隔30s,重復3~5次。亦可手動勻漿,制備好的勻漿液不可離心,待用。
也可用裂解液裂解(TritonX-100,1-2%,裂解30-40分鐘),裂解好的液體不可離心,待用。
注:破碎好的液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎。
使用方法:
酶標儀TG測定操作:
1、 下表依次加入試劑:
2、 充分混勻, 37℃水浴中孵育10分鐘。
3、 酶標儀測定500~520nm吸光度。以空白管調零,讀取標準管和各待測管的吸光度。
計算:
血清、血漿等液體樣本(空白調零):
TG(mmol/L)={(樣品管吸光度-空白管吸光度)/(標準管吸光度-空白管吸光度)}×標準品濃度(2.26mmol/L)
細胞、組織等樣本(空白調零):
TG(mmol/gprot)={(樣品管吸光度-空白管吸光度)/(標準管吸光度-空白管吸光度)}×標準品濃度(2.26mmol/L)÷待測樣本蛋白濃度(gprot/L)
備注:
? 可根據使用儀器不同,等比例改變試劑與樣本的量。
? 樣品含量如超出檢測范圍上,可用生理鹽水稀釋樣本后進行測定,測定結果乘以稀釋倍數。
? 試劑防止葡萄糖、等試劑的污染。
? 試劑與樣本量可按照的要求,按照1:100的比例增減
參考值:
健康成年人理想范圍:<1.7mmol/L(<150mg/dl)
邊緣升高:<1.7~2.25mmol/L(150~199mg/dl)
升高:<2.26~5.64mmol/L(200~499mg/dl)
很高:≥565mmol/L(≥500mg/dl)
性能指標:
1. 空白管OD≤0.2(光徑0.5cm)
2. 線性:0~9.04mmol/L范圍內,r2>0.995
3. 準確度: 相對偏差≤10%。
4. 靈敏度:檢測2.26mmol/L樣品管時,吸光度△A再0.2200~0.2900之間。
5. 測量精密度:批內<5%,批間<8%