使用方法
A． 細胞裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的SDS裂解液中加入4ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個細胞，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細胞中加入500ul冷的裂解液（每106個細胞加100ul SDS裂解液。大約相當于6孔板的每孔加入100ul~150ul，或一個75 cm2培養瓶加1~2 ml。裂解液和細胞應充分接觸。如果SDS裂解液不足量，細胞裂解效率將會降低），混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
B． 組織裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的SDS裂解液加入4ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100mg組織樣本剪碎，加入1ml裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預冷的干凈離心管中，在4℃，10000rpm條件下離心5分鐘。
4. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存備用。
2
化工儀器網