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-20℃ 避光

1.長期不用可以-80℃保存。避免反復凍融。 2.探針液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。 3.可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。 4.試劑拆封后請盡快使用完！

三個月

激光共聚焦/流式/熒光分光光度計/熒光酶標儀

細胞

1.使用方便：操作步驟簡單； 2.安全：無需處理放射性物質。； 3.線性范圍寬，可檢測葡萄糖攝取的微小變化。

1.激光共聚焦/流式/熒光分光光度計/熒光酶標儀 2.離心機 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒

1.不含葡萄糖的培養基 2.HBSS

1.離心管 2.吸頭 3.一次性手套 4.黑色透明底熒光專用96孔板

1.預實驗很重要。必須要做預實驗，在正式實驗之前取少量樣本優化實驗條件，并像正式樣本一樣認真進行，看實驗結果是否可行，實驗條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實驗條件通常差異較大，同種細胞的不同模型下需要的實驗條件也可能不同，為了避免浪費正式樣本和試劑，一定要提前預實驗優化實驗條件。 2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。 3. G61染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。 4.使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

試劑準備： 根據樣本數量，用37℃預熱的不含葡萄糖的培養基將G61探針500-1000倍稀釋。充分混勻，配制成染色工作液，備用。 根據樣本數量，用洗滌液B2將洗滌液B1進行20倍稀釋，配制成洗滌液B，然后用冰浴的HBSS將洗滌液B進行50倍稀釋。充分混勻，配制成洗滌液工作液，冰浴備用。 樣本檢測： 1.將細胞接種到培養皿或孔板中，制備相應的待檢測模型。 【注】： ?以下以貼壁細胞原位檢測為例，懸浮細胞按相應步驟操作即可。需流式檢測時，用 消化收集細胞。 2.培養好的待測細胞去除培養基，用預熱的不含葡萄糖的培養基清洗 2-3 次。 3.添加預熱的不含葡萄糖的培養基，37℃、5% CO2 培養箱中培養 15-20 min。 4.去除培養基，加入預熱的染色工作液，37℃、5% CO2 培養箱中培養 15 min。 【注】： ?染色工作液用量以相應的培養器皿的培養基量為準。例如24孔板一般用300 μl染色液。以有效覆蓋細胞為準。 ?不同樣本的染色時間不同，需要根據預實驗結果調整。一般在5-60分鐘范圍內調整染色時間。15分鐘適用于很多常見樣本。 ?必須使用37℃預熱的染色工作液。 5.去除染色液，用預冷的洗滌液工作液清洗2次。 【注】： ?加入洗滌液后輕微晃動然后直接移除即可。 ?必須使用預冷的洗滌液工作液。 6.去除洗滌液，添加預冷的洗滌液工作液，室溫靜置 5 min。 【注】： ?此步驟必須靜置5分鐘，為第三次洗滌的必要步驟，有利于減少背景。 ?如果背景高，可以再洗滌第4次。 ?必須使用預冷的洗滌液工作液。 7.去除洗滌液，添加預冷的洗滌液工作液，用共聚焦顯微鏡進行拍照分析。

1.活細胞染色后，可以進行細胞固定的操作嗎？？ 由于固定操作時熒光探針會從細胞內漏出，染色后不能進行細胞固定。 2.用熒光酶標儀檢測，對微孔板有什么特別要求嗎？ 需要使用熒光檢測用的細胞培養板。 3.被細胞攝入后，會被分解或代謝掉嗎？ 實驗過程中的操作不會造成分解。 4.無法觀察到熒光信號變化，是什么原因？ 可能時由于染色條件需要優化。預實驗的時候可以先從稀釋濃度（250倍~1000倍）、染色時間(5 min~1 h)范圍內進行摸索。 5.熒光染料可以在細胞內停留多長時間？ 一般在室溫下可以保持在細胞內1 小時左右，不同的細胞種類，時間會有一定差別。 6.試劑盒可以定量嗎？ 不可以定量。本試劑盒是葡萄糖攝取能力強弱或增減的定性檢測試劑盒。