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研究羊水干細胞分泌細胞因子及其對人臍靜脈內皮細胞增殖和凋亡的影響
閱讀：144 發布時間：2018-11-13小鼠胰島β細胞關于細胞移植的功效
重點在于其分泌的促增殖或抗凋亡的細胞因子,羊水干細胞能否分泌相關細胞因子有必要深入分析。
目的:觀察分離培養的羊水干細胞分泌細胞因子情況,及其對人臍靜脈內皮細胞增殖和凋亡的作用。
設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2008-12/2009-06在南昌大學附屬醫院高血壓病研究所完成。材料:10例剖宮產孕婦足月羊水,50mL/例,用于分離培養羊水干細胞,同時留取其產后臍靜脈用于分離培養內皮細胞,取前均獲孕婦知情同意。
方法:①貼壁法分離培養羊水干細胞,達80%融合時胰酶消化傳代,取傳至第3代細胞,調整細胞密度為5×108L-1,分為2組:缺氧羊水干細胞組通入體積分數為2%O2+體積分數為5%CO2+體積分數為93%N2,常規羊水干細胞組通入體積分數為5%CO2+體積分數為95%空氣,兩組細胞37℃培養24h,收集各自培養上清液及細胞以備分析。
②取體外分離培養的第2代人臍靜脈內皮細胞,以2×104細胞/孔的密度接種于12孔板,分為3組:對照組加入含體積分數為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養液2mL,常規羊水干細胞組加入含體積分數為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養液1mL+羊水干細胞培養液1mL,缺氧羊水干細胞組加入含體積分數為5%胎牛血清的EBM-2新鮮培養液1mL+缺氧誘導羊水干細胞培養液1mL,培養3d,加入10μg/L腫瘤壞死因子α誘導細胞凋亡。
主要觀察指標:流式細胞儀測定羊水干細胞表面抗原表達,ELISA法測定羊水干細胞分泌血管內皮細胞生長因子、肝細胞生長因子情況,RT-PCR法測定細胞因子mRNA的表達,檢測內皮細胞增殖率及凋亡率。
結果:培養7d后羊水干細胞呈長梭形,以漩渦狀、輻射狀排列,第3代羊水干細胞呈CD29+,CD105+,CD34-。
常規培養的羊水干細胞可分泌血管內皮細胞生長因子、肝細胞生長因子;缺氧誘導條件下血管內皮細胞生長因子水平明顯增加(P0.01),其mRNA表達明顯上調(P0.05),而肝細胞生長因子含量及mRNA的表達均無明顯變化(P0.05)。
與對照組比較,培養3d后常規羊水干細胞組、缺氧羊水干細胞組內皮細胞數均明顯增加(P0.05),腫瘤壞死因子α誘導凋亡24h后內皮細胞凋亡率均明顯降低(P0.05),且缺氧羊水干細胞組變化幅度大于常規羊水干細胞組(P0.05)
。結論:羊水干細胞可分泌血管內皮細胞生長因子、肝細胞生長因子,羊水干細胞培養液能促進內皮細胞增殖,抑制內皮細胞凋亡。經缺氧處理后,羊水干細胞分泌血管內皮細胞生長因子的能力增加,對內皮細胞的增殖和凋亡干預作用增強。