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PCR常見類型及PCR反應基本步驟
閱讀：687 發布時間：2023-5-15聚合酶鏈反應技術（Polymerase chain raction ,PCR）是一種在體外擴增特定DNA片段的方法，具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍。
一、PCR常見類型
常規PCR：
直接PCR是指直接從樣品擴增目標DNA，無需進行核酸分離純化。
熱啟動PCR：
熱啟動PCR常用于增強PCR擴增的特異性。該方法主要利用抗體、親合配體、適體或化學修飾物等酶修飾酶，來抑制室溫下的DNA聚合酶的活性。這種修飾使得在PCR體系配制階段引物與模板、引物與引物之前的結合能力降低，從而避免了非特異性擴增。
巢式PCR：
巢式PCR是標準PCR的一種演變，其增強了反應特異性和目標擴增子的產量。
快速PCR：
在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增，且不會影響擴增產量和效率。快速循環條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個結合中可引入更多的核苷酸。
高GC含量PCR：
具有高GC含量（>65%）的DNA模板由于G和C堿基間的強氫鍵影響，比較難以擴增。富含GC的序列同時也涉及二級結構。因此，富含GC的序列可導致DNA聚合酶沿模板擴增時“卡頓"并干擾DNA合成。
多重 PCR:
多重PCR可在同一PCR反應管中同時擴增多個不同的片段。多種PCR不僅意味著節省時間、試劑和樣品，還能夠同時對比多個擴增子
長片段 PCR:
長片段PCR通常是指擴增大于5kb的DNA片段。長片段PCR傳統上使用 Taq DNA 聚合酶（用于快速延伸）和高保真酶（用于提高準確性）的混合物。
定量PCR:
序列的擴增程度（得率）取決于模板起始量，PCR常用于對樣品中的DNA進行定量，其中，最常見的應用是 基因表達定量。
二、PCR反應基本步驟
變性：根據DNA高溫變性的原理，將反應體系溫度升至變性溫度（高于模板熔點，約95℃），使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板（單鏈）。[95℃，30s]
退火：將反應體系溫度驟降至退火溫度（低于引物熔點約55℃），是PCR引物與PCR模板3’端雜交，稱為退火。[55~65℃，30s]
延伸：將反應體系溫度升至延伸溫度（約72℃），DNA聚合酶按照堿基配對原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈，使目的DNA拷貝數增加1倍。[72℃，30~60s]