化工儀器網
技術文章
ELISA試劑盒試驗常見問題解析
閱讀：184 發布時間：2023-4-20ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。
ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因及解決辦法分析：
1、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2、加樣可能原因：
1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)；
3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
ELISA試劑盒解決辦法：
1） 標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時，請分批操作。
3 孵育可能原因：
1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗徹di；
2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹di。