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單克隆抗體的制備凍存及純化
閱讀：664 發布時間：2022-2-15單克隆抗體的制備和凍存：
篩選出的陽性細胞株應及早進行抗體制備，因為融合細胞隨培養時間延長，發生污染、染包體丟失和細胞死亡的機率增加。抗體制備有兩種方法。一是增量培養法，即將雜交瘤細胞在體外培養，在培養液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設備，一般應用無血清培養基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。*普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有時甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達數毫克甚至數十毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便于抗體的純化。接種細胞的數量應適當，一般為5×105/鼠，可根據腹水生長情況適當增減。
選出的陽性細胞株應及早凍存。凍存的溫度越低越好，凍存于液氮的細胞株活性僅有輕微的降低，而凍存在－70℃冰箱則活性改變較快。細胞不同于菌種，凍存過程中需格外小心。二甲亞砜（DMSO）是普遍應用的凍存保護劑。凍存細胞復蘇后的活性多在50％～95％之間。如果低于50％，則說明凍存復蘇過程有問題.
單克隆抗體的純化：
單克隆抗體的純化方法同多克隆抗體的純化，腹水特異性抗體的濃度較抗血清中的多克隆抗體高，純化效果好。按所要求的純度不同采用相應的純化方法。一般采用鹽析、凝膠過濾和離子交換層析等步驟達到純化目的，也有采用較簡單的酸沉淀方法。目前有效的單克隆抗體純化方法為親和純化法，多用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠球蛋白抗體與載體（*常用Sepharose）交聯，制備親和層析柱將抗體結合后洗脫，回收率可達90％以上。蛋白可與IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3結合，同時還結合少量的IgM。洗脫液中的抗體濃度可用紫外光吸收法粗測，小鼠IgG單克隆抗體溶液在A280nm時，1.44（吸光單位）相當于1mg/ml。經低pH洗脫后在收集管內預置中和液或速加中和液對保持純化抗體的活性至關重要。