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選擇合適的抗體的實用方法
閱讀：446 發布時間：2021-11-3抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌，被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。
一、一抗的選擇
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：
1. 實驗應用的類型
一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WB /IHC /ICC /ELISA分析等，如果抗體說明書沒有說明提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經過此種分析試驗驗證。如果抗體不適用某些分析試驗，會在抗體說明書上標注出來不適于某分析試驗。
2. 樣本蛋白的提取或處理
某些抗體要求樣本經過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結構阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體只識別天然折疊的蛋白。當選擇免疫組化的抗體時，應注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則使用于無需抗原修復解交聯步驟的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應用部分標示出來。
所以綜上所述：
適用于IP（天然蛋白）的抗體不一定適用于WB（表位暴露）
適用于WB的不一定適用于IHC
適用于IHC-P（抗原修復）的不一定適用于IHC-Fr（不修復）
購買前，務必仔細閱讀抗體說明書！
3. 樣本的物種
一般來說，在使用偶聯二抗結合無偶聯物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇比較重要，對與免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內源性免疫球蛋白產生交叉反應。一抗的來源主要有兔子和小鼠這兩個物種，意思也就是，如果你的樣本是兔子的，那就避免買兔來源的一抗；如果你的樣本是小鼠的，那就避免買小鼠源的一抗。
4. 單克隆與多克隆
由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合。同一個抗原決定簇在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。
在抗原抗體反應中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高。
二、二抗的選擇
二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標簽。由于二抗所具備的優點使得其在免疫學實驗中得以廣泛應用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。
二抗，廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾個方面考慮：
1.一抗的種屬來源
根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。例如：一抗是小鼠源的單克抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。
2.一抗的類別亞型
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會在產品說明書中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，或者你也可以選擇專門針對這一亞型的二抗。此種抗體在雙標記實驗中尤其合適。
3.二抗的藕聯標記
一般來講，藕聯到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP）、熒光基團、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。WB和ELISA常用的二抗是酶標二抗，而免疫熒光實驗中通常使用熒光基團標記的二抗，而金顆粒標記的二抗則更多的應用于免疫電鏡中。
寫在最后：抗體廣泛應用于各種科研領域，且價格不菲。謹慎選擇質量可靠，適用的抗體能夠有效避免科研時間及成本的浪費，不要因為貪圖便宜，選擇了一些“平價替代"產品，其質量及售后，無法有效保證。