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黑化大家鼠肺成纖維細胞;NRm操作流程

閱讀:248          發布時間:2019-11-22

                     黑化大家鼠肺成纖維細胞;NRm操作流程

已是十一月末。一年又快到頭了。回憶千絲萬縷如煙霧繚繞,即使我用文字頻繁的記錄下生活的種種鏡頭,也握不緊,抓不住它。許多瑣碎和細節,無法用任何形式表達,唯有腐爛成尸骸,消融在遠去的歲月里。接下來介紹   黑化大家鼠肺成纖維細胞;NRm操作流程

冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。

冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。

操作步驟 :

  1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。   

2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中。   

3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將胰酶棄去,加入10ml培養液終止消化。   觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。   

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養液塞好橡皮塞,置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。   附:消化液配制方法:   稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。 

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