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服務：

我們可以根據您的應用需要，比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求，而量身定制檢測試劑盒，有效控制檢測試劑成本。公司產品僅用于科研并可提供免費代測。

產品名稱：Fbg人血纖蛋白原ELISA試劑盒
英文名稱：Human Fibrinogen,Fbg ELISA Kit
貨號：A097114
產品規格：96T/48T。

主要成分：酶標板,試劑,標準品等

性狀：盒裝液體

試劑盒保存：2-8℃低溫保存。

標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

標本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 小時或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30 分鐘內于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復凍融法可重復2 次）。

3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。

4、其它生物標本：請1000×g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。
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ELISA試劑盒優點：

1、抗體----高效、靈敏、特異

2、規范包被操作----吸附均勻，吸附性好，空白值低，孔底透明度高

3、先進的優化方案----重復性高，可靠性強

4、購買本公司的ELISA試劑盒，免費代測

5、技術服務要求：專業，規范，高效

6、適用于體液、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種類型的樣本

7、可檢測動物類型豐富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黃金地鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、山羊、鵝、雞、蝦、河蟹、鱸魚、斑馬魚等

8、可檢測指標齊全：炎癥因子、血管生成素、動脈粥樣硬化因子、趨化因子、生長因子基質金屬蛋白酶、脂肪因子等等

9、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，先進的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴。

注意事項：

1加樣：

①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；

②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；

③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。

2.溫育：

①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；

②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察；

③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應"，因此盡量采用水浴；

3.洗板：

①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；

②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；

③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數；

4.顯色：

ELISA試劑盒中，如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。

5.判定：

讀取結果要在15-30 min內完成，定性測定用肉眼判讀試驗結果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結果，酶標儀不應置于陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。

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產品屬性：

公司產品僅用于科研組成及試劑配制 :

1. 酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

ELISA試劑盒的組成:

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ELISA技術的*性：

（一）靈敏度高

雖然酶活性調節ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大ELISA中，檢測的靈敏度遠比RIA高。根據質量作用定律。即免疫反應所形成的免疫復合物量與反應物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數為1。已知1個摩爾濃度含6.02×1023個分子，那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達1.7×10-24mol/L。雖然在實際應用中由于反應條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達不到這個水平（大于104個分子），但表明Elisa在靈敏度方面的改進潛力是很大的。

（二）特異性強

從免疫反應的角度來說，Elisa與RIA的特異性應該是。但在ELISA方法中，由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應有專一性，從而增加了該方法的特異性。

（三）對儀器設備要求不高，測定成本低

Elisa測定在普通實驗室便可進行，常用的儀器設備包括加樣器、培養箱、酶標專用讀數器等。按現有價格折算，酶標儀的價格只及液閃儀的1/6至1/4，因此每測定一個樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法，還可在野外進行，操作十分方便。

（四）方法快速、簡便

均質酶免疫測定方法操作時，所有反應試劑均在同一體系內進行，不需任何分離步驟，操作十分簡便、快速，數分鐘便能得出結果。某些定性Elisa試劑盒，如國外的某些奶牛發情鑒定和妊娠診斷Elisa試劑盒，數分鐘時間便能完成一次測定。

（五）試劑保存時間較長

作為檢測指示劑用的酶和酶標記物，在低溫或干燥條件下相對穩定，可保存半年至數年之久。

（六）自動化程度高

Elisa由于不存在放射性同位素污染，因此，除加待測樣本需要人工操作外，其他各步驟均可用儀器自動化完成。在這種自動化條件下，平均每人每天可完成2000余個樣本的檢測工作。

（七）方法種類多

ELISA技術可以充分利用單克隆抗體的優點，并能利用某些非免疫反應試劑（如SPA、凝集素等）的作用，發展成為許多新方法。此外，發展Elisa技術還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因為用于ELISA技術的酶其種類遠遠多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣，有希望開發很多類型的酶用于Elisa，并建立相應的ELISA方法。相反，自然界的化學元素是有限的，放射性同位素的種類更加有限。第二，由于酶的多樣性，酶作用底物也有多種多樣，與此相對應的生色源或供氫體的種類也有遠大的開發和發展潛力。
操作步驟：

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

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