大鼠海馬神經元細胞

培養基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

傳代特性：屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.125%胰dan白酶

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

傳代比例：不傳代

細胞簡介：大鼠海馬神經元細胞分離自海馬體；海馬體(Hippocampus)，又名海馬回、海馬區、大腦海馬，海馬體主要負責記憶和學習。海馬神經元細胞是海馬區的主要細胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統，在學習、記憶、情緒反應及神經系統疾病的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是中樞神經系統內主要的神經干細胞聚集區，具有高度序化板層結構和神經元相對獨立分布的特點，境界相對清晰，便于取材，因此，海馬神經元體外培養模型被廣大基礎醫學和臨床醫學研究者當做理想的實驗模型。海馬神經元細胞培養是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型，其在神經生物學，發育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。
一、細胞基本屬性

原代細胞分離培養的思路：

取材--分離--培養--鑒定

首先將組織從機體中取出，經胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細胞，再在合適的培養基中培養，使細胞繁殖到一定系數后進行細胞鑒定。

實驗步驟：

一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。

四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。

五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。

七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。

加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含素的混合培養基，隨后隔天換液。

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注意事項：

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，yi酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和技術部溝通；由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。