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T7體外轉錄試劑盒

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更新時間:2022-04-13 09:41:43瀏覽次數:270

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 50次
貨號 FS-P013324 應用領域 化工
主要用途 公司產品僅供科研    
T7體外轉錄試劑盒正在出售的產品:DMEM / F-12(1∶1)培養基規格:500ml
IMDM培養基規格:500ml
Leibovitz’s L-15培養基規格:500ml

詳細介紹

特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!

產品名稱

規格

貨號

T7體外轉錄試劑盒

50次

FS-P013324

組成及試劑配制:

1、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

QQ截圖20201022162313.png 

實驗外包:

1.基因組學:基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析

2.轉錄組學:microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq

3.蛋白質組學:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白質檢測:Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA

6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選

7.代謝組學:GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型:原代細胞、細胞模型、動物模型構建

使用方法:

一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,

多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),

一個是NC(樣品制備陰性對照)。

可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒。

三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)

10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

 

 

 

 

 

 

 

 

PCR實驗步驟:

①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。

②兩相分離 每1ml的試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液,每1ml試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑瘤衍生亮拉鏈額外核因子Multi-class antibodies: 48T

 TFAR19/PDCD5 凋亡相關蛋白TFAR19抗體Multi-class antibodies: 0.1ml

Rhesus antibody Rh HN1/ARM2 雄調節蛋白2抗體  0.2ml

LH(Mouse luteotropic hormone)ELISA Kit 小鼠促黃體 96T

PRAME 黑色瘤優先表達抗原抗體 0.2ml

CDKN2C 細胞周期蛋白依賴性激抑制劑2C抗體 0.2ml

 TFAR19/PDCD5 凋亡相關蛋白TFAR19抗體Multi-class antibodies: 0.1ml

P I NP(Human procollagen I N-terminal peptide) ELISA Kit 人Ⅰ型前膠原N端前肽Multi-class antibodies: 48T

 HSTF2/HSF2 熱休克轉錄因子2抗體Multi-class antibodies: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Matrilin 1 軟骨基質蛋白抗體  0.2ml

cPLA2(Human cytosolic phospholipase A2) ELISA Kit 人胞漿型磷脂A2 96T

Rarres3 視黃受體應答蛋白3抗體 0.1ml

CXCR7 細胞表面趨化因子受體7抗體 0.1ml

 HSTF2/HSF2 熱休克轉錄因子2抗體Multi-class antibodies: 0.2ml

Rabbit  human sIgA/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

GNG5 G蛋白γ5/Gγ5 抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh AMH/MIS Muellerian繆勒管抑制因子抗體  0.2ml

 JNK1/3 /FITC 熒光標記c-Jun氨基末端激1/3抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit  horse IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗馬IgG  0.1ml

 Phospho-SHIP2 (Tyr580)/FITC 熒光標記磷化蛋白酪磷2抗體IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
T7體外轉錄試劑盒人纖維蛋白肽A(FPA)elisa檢測試劑盒

人血紅氧化2(HO2)elisa檢測試劑盒

人血清/糖皮質調節2(SGK2)elisa檢測試劑盒

人乳脂球表皮生長因子8 (MFG-E8)elisa檢測試劑盒

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa檢測試劑盒

人生長抑受體2(SSTR2)elisa檢測試劑盒

人血小板活因子ib3(PAFAHIB3)elisa檢測試劑盒

人纖維蛋白肽B(FPB)elisa檢測試劑盒

人血管內皮抑抗體(ES-Ab)elisa檢測試劑盒

人血紅蛋白C(HbC)elisa檢測試劑盒

人血管內皮生長因子受體3(VEGFR3/Flt4)elisa檢測試劑盒

人嗅4(OLFM4)elisa檢測試劑盒

人肥胖抑制(OB)elisa檢測試劑盒

人性別決定區Y框蛋白3(SOX3)elisa檢測試劑盒

人蛋白3(PR3)elisa檢測試劑盒


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