詳細介紹
培養操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
CCT128930 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
CCT128930是一種有效的選擇性Akt2抑制劑(IC50為6nM),比作用于PKA激酶(IC50為168nM)選擇性高28倍,比作用于p70S6K(IC50為120nM)選擇性高20倍。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:885499-61-6 純度:99.71% 分子量:341.84 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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Akt2抑制劑(CCT128930)烯葡聚糖凝膠S-400 HR
英文名稱:Sephacryl S-400 High resolution
產品規格:BR
包裝:150毫升
CAS號:65546-95-4
級別:BR
Useful fractionation range(MW):globular proteins 2×104~8×106;dextrans 1×104~2×106
DNA exlusion limit(base pairs):271
Bead form:Spherical,diameter 25-75um in wet form
Bead structure:Allyl dextran and N,N-methylene bisacrylamide
pH stability:long term 3~11,short term 2~13
Chemical stability:Stable to all commonly used fuffers:0.2M NaOH;0.1M HC1;1M acetic acid;8M urea;6M guanidine HC1;1% SDS;2M NaC1;24% ethanol;30% propanol;30% acetonitrile(tested at 40℃ for 7 days)
Physical stability:Negligible volume variation due to changes in pH or ionic strength
性狀:含20%乙,底部為膠體。
用途:生化研究。For size exclusion chromatography; the HR grade is a smaller particle size with narrower size range distribution, allowing for more efficient separations at faster flow rates. Recommended fractionation ranges are listed for globular proteins and dextrans
保存:2~8℃