化工儀器網
技術文章
干粉培養基原倍液的配制
閱讀：134 發布時間：2024-8-291、配制過濾除菌的細胞培養基
(1) 閱讀培養基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。
(2) 根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。
(3) 加入規定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質。
(4) 輕微攪拌溶解，加注射用水至規定體積。
(5) 用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調pH至所需值。
(6) 用0.22 μm濾膜正壓過濾除菌。
(7) 溶液應在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養基包裝袋上的說明書。
2、配制可高壓滅菌細胞培養基
(1) 根據所需將培養基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內殘留培養基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解
(2) 在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
(3) 待溶液冷卻至室溫，加入無菌0.2 mol / L L－谷氨酰胺溶液規定體積、無菌7.5％（w/v）碳酸氫鈉溶液規定體積，加注射用水（20℃～30℃）至規定體積，混勻。
(4) 如果必要，用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調pH至所需值。
(5) 溶液應在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養基包裝袋上的說明書
注意事項：
1） 細胞培養用水一般為三蒸水（經石英蒸餾器蒸餾）或超純水，醫藥生產上一般為注射用水。
2） 建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用，因為包裝一旦打開，組分可能會變質或因受潮而結團。
3） 溶解干粉培養基時先加入終體積90％－95％的培養用水，添加劑加完后再補足。
4） 如需添加的組分較多時，某一組分全溶解后，再添加另一組分。
5） 待培養基全溶解后再加入碳酸氫鈉，以免產生沉淀。
6） 所有成分全溶解后，培養基應立即過濾或高壓除菌，以免產生沉淀或有微生物污染。
7） 在過濾除菌時，一般情況下應調pH比所需值低0.1～0.2個單位，因過濾除菌后，pH值會升高約0.2。
8） 在細胞培養過程中，建議不加或加少量的抗生素，如血清的濃度較低則所加抗生素的量也要相應降低一些。
9） 建議用1 N HCl或1 N NaOH來調節培養基的pH，因為用碳酸氫鈉來調對培養液的滲透壓影響比較大。