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Elisa常見樣本處理方法
閱讀：349 發布時間：2021-8-11Elisa是一種快速、靈敏、準確可靠的定量分析方法。樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有舉足輕重的作用。
利用 ELISA 進行檢測的樣本類型包括：血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清，皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、陰道分泌物等。
下面我們就常見的樣本處理方法：
血液采取后應盡快進行處理，使血清（漿）從與血細胞接觸的全血中分離出來。
Q: 血清與血漿的區別?
A: 血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和 抗凝劑外，其他成份均等同于血清。
Q: 選擇血清還是血漿樣本？
A: 由于血清中缺乏很多的凝血因子，但有凝血產物。如果測凝血因子建議選擇血漿樣本；同時血漿中有纖維蛋白原，如果纖維蛋白原對待檢測指標有影響，建議選擇血清樣本。
大多數情況下二者均可以選擇。
處理方法：
1、血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4 度過夜，然后1000×g 離心20分鐘，取上清即可。這是一個讓血液自然凝固的過程，溫度越低，凝集越緩慢，可根據需要添加促凝劑。
2、血漿：血漿樣本需要抗凝，一般建議用2.0%EDTA，1%肝素，3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2~8度1000g離心15分鐘，取上清即可檢測。根據待檢測目標物的性質不同選取不同的抗凝劑。
3、枸櫞酸鈉(檸檬酸鈉)：Ca2+有凝血作用，枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，從而阻止血液凝固。配成 109mmol/L的濃度和血液1:9, 106mmol/L的濃度和血液1:4
缺點：血液中溶解度低，抗凝作用較弱。
優點：對凝血因子有很好的保護作用，大部分凝血試驗都可用枸櫞酸鈉抗凝。
4、二胺四乙酸（EDTA）鹽：與血液中的鈣離子結合形成配位化合物， 從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10
優點：對紅細胞和白細胞形態影響小。
缺點：影響血小板的聚集。不適用于凝血實驗和血小板功能相關實驗的檢 測。
5、肝素：通過與抗凝血酶Ⅲ結合，增強抗凝血酶的作用，滅活絲氨酸蛋白 酶，從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L 與血液 1:10
優點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。
缺點：引起白細胞聚集。肝素抗凝血應于短時間內使用，否則放置過久血 液又可凝固。