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其它源細胞培養傳代及凍存方法
閱讀：464 發布時間：2021-4-27其它源細胞培養傳代及凍存：
?細胞的復蘇培養:從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
?細胞傳代:原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
?細胞形態的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
?生長曲線:取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線
?細胞的貼壁率:指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。
?細胞的計數:常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
售后服務：
產品在運輸的過程中，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，因此客戶在收到貨以后的*時間是要先觀察產品的狀況，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要立即打開培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱過夜，并于次日在顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如果發現細胞仍不能貼壁，請試著用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理；如若證實細胞無活力，請在收到貨后48小時內將細胞狀態反饋給我公司，我們將盡快幫助解決。