詳細介紹
細胞名稱 人胚腎細胞(SV40T基因修飾);293T/17培養
形態特性 上皮細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 293細胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產生的高轉染效率的衍生株稱為293T。
培養條件 DMEM-H:
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優質胎牛血清,10%
傳代方法 消化5-15分鐘。1:4-1:8。3天內可長滿。
傳代情況 P(17+5)
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
人胚腎細胞(SV40T基因修飾);293T/17培養操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
Anti-FANCD2(phospho Ser222) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化FANCD2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Nebulin/FITC 熒光素標記伴肌動蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C12ORF49 12號染色體開放閱讀框49抗體 規格 0.2ml
PACAP/VIP receptor 腺苷酸環化酶激活肽/血管活性腸肽受體(抗原) 0.5mg
Centromeric histone H3-like protein-2 英文名稱: 組蛋白H3樣蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RNF24 環指蛋白24抗體 規格 0.2ml
Anti-Nebulin/FITC 熒光素標記伴肌動蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
VC ELISA Kit 大鼠維生素CMulti-class antibodies規格: 48T
Anti-ABCG2/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠ABCG2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FKSG14/Centromere protein K 著絲粒蛋白K 規格 0.2ml
MDC/CCL22(Human Macrophage-Derived Chemokine) ELISA kit 人巨噬細胞來源的趨化因子 96T
phospho-MAP1LC3A(Ser12) 英文名稱: 磷酸化自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體 0.1ml
ACTH (7-23) 英文名稱: 促腎上腺皮質激素ACTH (7-23)抗體 0.1ml
Anti-ABCG2/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠ABCG2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
人核糖核酸酶A2(RNASE2)ELISA試劑盒人96T6.25-400 U/mL大鼠脂肪酸轉運蛋白5(FATP5)ELISA試劑盒,英文名:FATP5 ELISA Kit豚鼠白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒,英文名:IL12B ELISA KiISA Kit for Human Adenosine receptor A1小鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒,英文名:Free-T3 ELISA Kit人載脂蛋白B(Apo-B)ELISA試劑盒人96T78-5000 ng/mL小鼠心肌營養素1(CT-1)ELISA試劑盒,英文名:CT-1 ELISA KiISA Kit for Human Alpha-actinin-3小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒,英文名:GHRP ELISA Kitβ羥丁酸(beta-Hydroxybutyric acid)ELISA試劑盒通用96T0.156-10 umol/L小鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒,英文名:NGB ELISA KiISA Kit for Chondroitin sulfate小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒,英文名:MDC/CCL22 ELISA Kit
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鼠兔通用SP(HRP)試劑盒 140片 進口原料
Ubiquitin D 英文名稱: 泛素D抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATF2(Ser94) 磷酸化活化復制因子2抗體 規格 0.1ml
N-ras 原癌基因抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
DUSP13 英文名稱: 雙特異性磷酸酶13抗體 0.2ml
Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-HBME-1 /FITC 熒光素標記間質細胞HBME1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白TFAR19抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Batroxobin 蛇毒巴曲酶抗體 規格 0.2ml
5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4) 5-羥色胺受體4抗原 0.5mg
GRO Alpha 英文名稱: 生長調節致癌基因-1抗體GROa 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗大鼠IgG 規格 0.1ml
Anti-TFAR19/PDCD5 /FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白TFAR19抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml