詳細介紹
細胞名稱 人胚腎細胞;293 [HEK-293]培養
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側端和右側端的DNA,但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現,Ad5的1~4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主。可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:10~1:20傳代,每2~3天換液1次。
傳代情況 P20
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:7,12;D13S317:12;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D7S820:11;D8S1179:12,14;FGA:23;TH01:7,9.3;TPOX:11;vWA:16,19;
同工酶
染色體
使用權限 A類
人胚腎細胞;293 [HEK-293]培養操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
人胚腎細胞;293 [HEK-293]培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
人胚腎細胞;293 [HEK-293]培養懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。
2,2-二(2-四氫呋喃基)丙烷 (S)-1-N-叔丁氧羰基-3-羥基吡咯烷 六甲基環三硅氧烷
烯丙基*氧基硅烷 (R)-2-甲基-CBS (2-溴乙氧基)-特丁基二甲基硅烷
正十二烷基二甲基氯硅烷 碘代叔丁烷 異丙烯-2,3-二羥-1,4-雙二丙基膦丁烷
2-氯-2-氧-1,3,2-二氧磷雜環戊烷 三氟 烯丙氧基-叔丁基-二甲基硅烷
9-硼雙環[3.3.1]壬烷 二溴氟甲烷 1,6-二氯己烷
1,3-二碘丙烷 1,2-二溴四氟乙烷 1,3-二甲基金剛烷
4-苯硼酸頻哪吡咯烷 N-(2-氨乙基)-3-氨丙基三乙氧基硅烷 甲基苯基二氯硅烷
黑色素-1 1,5-二氨基戊烷 七氟-2-碘代丙烷
1-氯-3-苯基丙烷 1,2-二碘乙烷 2-(二苯基羥亞膦基)乙基三乙氧基硅烷
1-Boc-3-甲氨基吡咯烷 環硫乙烷 1,3,3-三乙氧基丙烷
1,2-雙*氧基硅基乙烷 全氟辛基碘烷 1-氯庚烷
3-甲基丙烯酰氧基丙基甲基二甲氧基硅烷 全氟碘代丁烷 乙烯基二甲基乙氧基硅烷
1,3-二噻烷 N,N-二甲氨基氯丙烷鹽酸鹽 1,3-雙(2,4-二氨基苯氧基)丙烷
(3,3,3-三氟丙基)二氯甲基硅烷 2-氨基-5-二乙基氨基戊烷 3-氨基戊烷
1,5-二氰基戊烷 氯甲基二甲基氯硅烷 馬來酸氯苯那敏
1-甲基-1-乙基溴化吡咯烷 二乙基(3-吡啶基 甲基乙烯基二甲氧基硅烷
三異丙基硅烷 1,1,2-*基丙基二甲基氯硅烷 乙基硼酸
1-氯-3-乙氧基丙烷 癸基二甲基氯硅烷 (R)-(+)-1-Boc-3-氨基吡咯烷
3-(Boc-氨基)吡咯烷 苯基二甲基氯硅烷 二甲氧基二甲基硅烷
白細胞裂解液
非凍型尿液DNA保存液
非凍型尿液DNA保存液
非凍型拭子DNA保存液(A型)
非凍型拭子DNA保存液(B型)
非凍型血液DNA保存液(100 mL)
非凍型血液DNA保存液(250 mL)
非凍型組織DNA保存液(100 mL)
紅細胞裂解液A型(核酸純化)
紅細胞裂解液B型(流式細胞分析用)
菌體內毒素清除劑
土壤腐殖酸清除劑
人胚腎細胞;293 [HEK-293]培養一步離心式石蠟清除劑
動物DNA提取
96孔板血液DNAout(真空法)(見關聯產品)
96孔板血液DNAout(離心法)(1次)
96孔板血液DNAout(離心法)(5次)
FTA血片DNAout(見關聯產品)