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內質網α-甘露糖苷酶1抗體抗體分子標記技術
閱讀：92 發布時間：2023-6-28內質網α-甘露糖苷酶1抗體抗體分子標記技術：
（一）原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為殘基,殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
（二）準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應終止緩沖液；
（三）操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；
2.如果氧化反應損傷蛋白質，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天）；
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；
6.碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
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