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獸疫鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-03-20 13:52:43瀏覽次數(shù):287

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)
英文名稱(chēng) Streptococcus zooepidemicusPCR 儲(chǔ)存條件 -20℃避光保存,避免反復(fù)凍融
分類(lèi) PCR檢測(cè)試劑盒    
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詳細(xì)介紹

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

規(guī)格

獸疫鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒

Streptococcus zooepidemicusPCR

50T

儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14或-20樣品收集、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.
血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3.
細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20
,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

詳1.png

定量PCR方法:

熒光定量PCR探針?lè)?/span>

熒光定量PCR SYBR Green染料法

快速PCR

多重 PCR

探針?lè)闯艘锿饬硗庠O(shè)置一個(gè)探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),這個(gè)時(shí)候,兩個(gè)平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過(guò)引物合成的時(shí)候,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),兩個(gè)距離較遠(yuǎn),發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,被機(jī)器收集到信號(hào),從而檢測(cè)基因的量

染料能夠與雙鏈結(jié)合,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,染料結(jié)合到DNA上,從而發(fā)光,單個(gè)的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號(hào),我們可以看出,染料法特異性不強(qiáng),只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。

在快速PCR中,通過(guò)縮減PCR步驟所需時(shí)間來(lái)完成更快的擴(kuò)增,且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,這類(lèi)聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/21/3,卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無(wú)幾,則可將它們合并為一步,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間。這一過(guò)程也被稱(chēng)為 兩步PCR法。

多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。


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PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,47000rpm離心5分鐘。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
小鼠0酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)(pERK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)ELISA試劑盒

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Anti-phospho-SHC (Tyr239/240)/FITC
熒光素標(biāo)記0酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

VTG(vitellogenin) 青鳉魚(yú)卵黃蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg

細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體 Anti-NFKBp65 0.1ml

SCUBE1 英文名稱(chēng): 新型血小板相關(guān)血管內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體 0.2ml

EV71 polyprotein VP1 英文名稱(chēng): 腸道病毒71型抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-p95 NBS1(Ser343) 0酸化滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1抗體 規(guī)格 0.1ml

VTG(vitellogenin) 青鳉魚(yú)卵黃蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg
獸疫鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) p27(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

Anti-Integrin alpha 2/CD49b 整合素α2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh P45017A1/Cytochrome P450 17A1  P450 17A1抗體 規(guī)格 0.1ml

CR2 Kit Human CD21 ELISA配對(duì)抗體 ELISA

TBL1Y 英文名稱(chēng): 轉(zhuǎn)導(dǎo)β樣蛋白1抗體 0.2ml

C6orf64 英文名稱(chēng): 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框64抗體 0.2ml

Anti-Integrin alpha 2/CD49b 整合素α2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1.
標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 765432
2.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3.
7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.
換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7.
用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8.
如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.
如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。


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