詳細介紹
使用方法
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3.在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.
重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7.用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8.如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱 | 英文名稱 | 規格 |
中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒 | Baculoviral Midgut Gland Necrosis Type Virus (BMNV)PCR | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3.細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設置一個探針,在探針的兩端分別帶上發光集團和淬滅集團,這個時候,兩個平衡不發光,但是當DNA通過引物合成的時候,探針被折斷,釋放出發光集團和淬滅集團,兩個距離較遠,發光集團產生熒光,被機器收集到信號,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結合,當PCR擴增的時候,染料結合到DNA上,從而發光,單個的染料不發光,這樣就能收集到信號,我們可以看出,染料法特異性不強,只要是雙鏈的DNA都回結合發光。 | 在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,且不會影響擴增產量和效率。快速循環條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,這類聚合酶在每個結合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,卻能維持較高的擴增效率。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,則可將它們合并為一步,以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,是在同一PCR反應管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關產品:
無齒類圓線蟲PCR檢測試劑盒
馬類圓線蟲PCR檢測試劑盒
豬類圓線蟲PCR檢測試劑盒
類圓線蟲通用PCR檢測試劑盒
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
Goat Anti-rat IgG/Cy5.5 Cy5.5
標記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
FNDC1: Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體 0.2ml
CC趨化因子受體4抗體 Anti-CCR-4 0.2ml
Anti-Phospho-NPM (Thr199) /FITC 熒光素標記0酸化核仁0酸蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PNAT/NAT2 N-乙酰基轉移酶2抗體 規格 0.1ml
Anti-HBeAg/FITC 熒光素標記小鼠抗人乙肝e抗原抗體(2)IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
小鼠脂蛋白相關0脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA試劑盒 ,英文名: Lp-PLA2 ELISA Kit
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA檢測試劑盒MouseSerumamyloidA,SAAELISAKit 96T/48T
人巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒 Human MIP-3α ELISA kit
Rataldehydedehydrogenase,ALDHELISAKit大鼠乙脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒規格:96T/48T
載玻片細胞βAMYLOID蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20次
Mouse6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISA試劑盒小鼠6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒規格:96T/48T
中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒3T3L1細胞,小鼠胚胎成纖維細胞(前脂肪) 癌細胞,ER-30細胞 體外管腔形成分析試劑盒IVTFA3,3'-Bithienyl(>98.0%(GC))3,3'-Bithiophene質量規格:>98.0%(GC)
非洲綠猴腎細胞;BS-C-12,1,3-苯并噻二唑(>99.0%(GC))2,1,3-Benzothiadiazole質量規格:>99.0%(GC)
IL25 Others Human IL25 細胞裂解液 (陽性對照) 4,5-去亞異丙基5-Desisopropylidene Topiramate質量規格:美國進口
滑膜細胞培養基SM-prfR-羥基R-Hydroxy Topiramate質量規格:美國進口
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) S-羥基S-Hydroxy Topiramate質量規格:美國進口