化工儀器網
技術文章
小鼠elisa檢測試劑盒實驗中的間接法
閱讀：329 發布時間：2018-9-26小鼠elisa檢測試劑盒自從60-70年代問世以來，得到*科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。 Elisa試劑盒生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。
Elisa試劑盒間接法的操作步驟為以下幾點：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.zui后一遍用DDW洗滌。
7.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
8.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。