化工儀器網
資料下載
正常細胞常規核型的標本制備實驗
閱讀：264 發布時間：2019-2-15| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 250.4KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數 | 55次 | |
| 資料類型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數 | 264次 |
| 免費下載 | 點擊下載 |
實驗方法原理 采用微量全血培養人體外周血中淋巴細胞，在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素，破壞細胞紡錘體的形成，使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞，低滲處理，使細胞脹大，染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質，使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片，然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。
實驗材料 外周血
試劑、試劑盒 640培養液肝素溶液秋水仙素胰蛋白酶EDTAPHAKCl甲醇冰醋酸Giemsa原液磷酸緩沖液生理鹽水
儀器、耗材 超凈臺鑷子離心機水浴箱天平離心管顯微鏡載玻片平皿
實驗步驟
1. 打開超凈臺紫外燈20~30分鐘。
2. 洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。啟動超凈臺，點燃煤氣燈。
3. 用75%酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面，然后將培養液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。
4. 在超凈臺內將每個培養瓶裝入5 ml 培養液及0.2 ml PHA溶液，封好備用。
5. 用5 ml 注射器，7號針頭，先吸取少許肝素濕潤針筒，然后從肘靜脈抽血1~2 ml。
6. 每個培養瓶接種全血0.2 ml 左右輕輕搖動使血和培養液混勻。
7. 在培養瓶上標記好供血者姓名、性別、采血日期等，放入培養箱中37℃培養。
8. 每天輕輕震蕩培養瓶二、三次，防止血球沉積并保證血細胞與培養液充分接觸，促進細胞生長繁殖。
收起
注意事項
試劑配方
500 單位／ml 的肝素溶液
10μg／ml 的秋水仙素溶液
0.25％胰蛋白酶一 0.02％EDTA 混合消化液
0.5mg／ml 的 PHA 溶液
0.075mol／L 的 KCl 溶液
磷酸緩沖液（pH6.8）
其他
1.人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞，正常情況下處于 G。期不再增殖。PHA（Phytohemagglutinin，植物血凝素）是人和其它動物淋巴細胞的有絲分裂刺激劑，它能使處于 G0 期的淋巴細胞轉化為淋巴母細胞，進入細胞周期開始旺盛的有絲分裂。
2.人體染色體常規核型的分析，在今天的染色體研究水平上作為染色體結構異常的疾病診斷已經失去意義，但對染色體數目異常仍具有診斷上的價值，尤其是起著分析其它幾種顯帶核型的橋梁作用。通過常規核型的分析必須掌握三點：（1）會分組；（2）了解各組染色體的基本形態特征；（3）會計數數目和鑒定性別。