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培養(yǎng)細胞單細胞懸液的制備

實驗材料    胰蛋白酶細胞
試劑、試劑盒    EDTA·2NaPBS
儀器、耗材    離心管
實驗步驟    
一、培養(yǎng)細胞的特征

一般細胞培養(yǎng)分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)，由于細胞的增殖有可能形成大小不等的細胞團塊或連接成片。如果兩個或多個細胞粘連在一塊或細胞碎片過多都將影響 FCM 結(jié)果，進而導致實驗失敗。所以，制備合格的培養(yǎng)細胞單細胞懸液十分重要。

二、培養(yǎng)細胞樣品的制備程序

1. 將培養(yǎng)細胞用 0.04% 乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA·2Na）或 0.29% 胰蛋白酶消化 3~7 min（根據(jù)室溫情況而定），至光鏡下見到貼壁細胞間出現(xiàn)篩狀間隙為止，棄去消化液，加 PBS 液。

2. 用吸管將細胞從瓶壁上輕輕吹打下來，并移入離心管中。

3. 短時低速離心，即 800~1000 r/min，5 min。

4. 棄上清，加 pH 7.4 的 PBS 液 5~8 ml，低速短時離心，800~1000 r/min 離心 3~5 min；重復 2~3 次，以去除細胞懸液中的細胞碎片。

5. 加少許 PBS 液，將沉淀細胞輕輕吹打均勻。加固定液或低溫保存待用。