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上皮細胞類培養(yǎng)實驗
閱讀：177 發(fā)布時間：2018-12-11| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 250.8KB |
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上皮細胞可來源于外，內、中三個胚層；但培養(yǎng)中只有源于外和內胚層的細胞能反映出上皮細胞的特征細胞呈膜狀生長的特點。而間皮和內皮剛接種培養(yǎng)和細胞量少時常呈成纖維細胞型，只有細胞數量較多時，才能顯出膜狀特點。內容來源：組織培養(yǎng)和分子細胞學技術
實驗方法原理 利于皮膚表皮細胞培養(yǎng)成功的因素有，在有膠原的底物上易生長；另有人發(fā)現把人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3 細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）上時，細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現象。降低pH、Ca2+的含量和溫度等，均利于表皮細胞生長。向培養(yǎng)基中加（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍亂毒素、10M-6 的異丙基腎上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生長因子（EGF）能促表皮細胞生長。
實驗材料 皮膚血清
試劑、試劑盒 EDTA胰蛋白酶Eagle
儀器、耗材 血管鉗吸管CO2溫箱
實驗步驟
皮膚是皮表細胞培養(yǎng)來源，小兒包皮是皮膚表皮細胞培養(yǎng)的好材料。全皮培養(yǎng)時，表皮細胞與成纖維細胞混合生長，難以純化。黑木登志夫（1981）用皮膚表皮和分離培養(yǎng)法可獲純上皮細胞，有一定參考價值，其法如下：
1. 取材
取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成 0.5~1 平方厘米小塊；
2. EDTA處理
先置入0.02 %EDTA 中室溫置5 分鐘；
3. 冷消化
換入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃過夜；
4. 分離
取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與層分開；
5. 溫消化
取出表皮單獨處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分鐘；
6. 用吸管輕輕反復吹打，使成細胞懸液；
7. 培養(yǎng)液
通過80 目不銹鋼紗網濾過后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和 20 %小牛血清，制成細胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養(yǎng)。
上皮細胞可來源于外，內、中三個胚層；但培養(yǎng)中只有源于外和內胚層的細胞能反映出上皮細胞的特征細胞呈膜狀生長的特點。而間皮和內皮剛接種培養(yǎng)和細胞量少時常呈成纖維細胞型，只有細胞數量較多時，才能顯出膜狀特點。內容來源：組織培養(yǎng)和分子細胞學技術
實驗方法原理 利于皮膚表皮細胞培養(yǎng)成功的因素有，在有膠原的底物上易生長；另有人發(fā)現把人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3 細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）上時，細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現象。降低pH、Ca2+的含量和溫度等，均利于表皮細胞生長。向培養(yǎng)基中加（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍亂毒素、10M-6 的異丙基腎上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生長因子（EGF）能促表皮細胞生長。
實驗材料 皮膚血清
試劑、試劑盒 EDTA胰蛋白酶Eagle
儀器、耗材 血管鉗吸管CO2溫箱
實驗步驟
皮膚是皮表細胞培養(yǎng)來源，小兒包皮是皮膚表皮細胞培養(yǎng)的好材料。全皮培養(yǎng)時，表皮細胞與成纖維細胞混合生長，難以純化。黑木登志夫（1981）用皮膚表皮和分離培養(yǎng)法可獲純上皮細胞，有一定參考價值，其法如下：
1. 取材
取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成 0.5~1 平方厘米小塊；
2. EDTA處理
先置入0.02 %EDTA 中室溫置5 分鐘；
3. 冷消化
換入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃過夜；
4. 分離
取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與層分開；
5. 溫消化
取出表皮單獨處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分鐘；
6. 用吸管輕輕反復吹打，使成細胞懸液；
7. 培養(yǎng)液
通過80 目不銹鋼紗網濾過后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和 20 %小牛血清，制成細胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養(yǎng)。
上皮細胞可來源于外，內、中三個胚層；但培養(yǎng)中只有源于外和內胚層的細胞能反映出上皮細胞的特征細胞呈膜狀生長的特點。而間皮和內皮剛接種培養(yǎng)和細胞量少時常呈成纖維細胞型，只有細胞數量較多時，才能顯出膜狀特點。內容來源：組織培養(yǎng)和分子細胞學技術
實驗方法原理 利于皮膚表皮細胞培養(yǎng)成功的因素有，在有膠原的底物上易生長；另有人發(fā)現把人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3 細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）上時，細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現象。降低pH、Ca2+的含量和溫度等，均利于表皮細胞生長。向培養(yǎng)基中加（ 10 μg/ml ）、10-10 的霍亂毒素、10M-6 的異丙基腎上腺素（Isopro-terenol）和10 ng/mI 促表皮生長因子（EGF）能促表皮細胞生長。
實驗材料 皮膚血清
試劑、試劑盒 EDTA胰蛋白酶Eagle
儀器、耗材 血管鉗吸管CO2溫箱
實驗步驟
皮膚是皮表細胞培養(yǎng)來源，小兒包皮是皮膚表皮細胞培養(yǎng)的好材料。全皮培養(yǎng)時，表皮細胞與成纖維細胞混合生長，難以純化。黑木登志夫（1981）用皮膚表皮和分離培養(yǎng)法可獲純上皮細胞，有一定參考價值，其法如下：
1. 取材
取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成 0.5~1 平方厘米小塊；
2. EDTA處理
先置入0.02 %EDTA 中室溫置5 分鐘；
3. 冷消化
換入0.25 %胰蛋白酶中，置4 ℃過夜；
4. 分離
取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與層分開；
5. 溫消化
取出表皮單獨處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25 %胰蛋白酶中，37 ℃再消化30~60 分鐘；
6. 用吸管輕輕反復吹打，使成細胞懸液；
7. 培養(yǎng)液
通過80 目不銹鋼紗網濾過后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和 20 %小牛血清，制成細胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養(yǎng)。
收起
注意事項
冷消化目的在于使表皮和結合松散，如冷消化后分離下來的表皮膜自身也已松散，此時亦可直接置入PBS中用吸管吹打制備細胞懸液；不再經過第二次消化。
其他
皮膚表皮培養(yǎng)亦可用全皮消化法或組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)。用膠原酶消化為好，它對結締組織有較強消化作用，對表皮細胞損傷小，但成纖維細胞易與上皮細胞同時生長，在這種情況下，需做排除成纖維胞處理。血清中含有血小板來源的生長因子（PDGF），易促成纖維細胞的生長；如用好的、不含PDGF的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)可能更好。
收起
注意事項
冷消化目的在于使表皮和結合松散，如冷消化后分離下來的表皮膜自身也已松散，此時亦可直接置入PBS中用吸管吹打制備細胞懸液；不再經過第二次消化。
其他
皮膚表皮培養(yǎng)亦可用全皮消化法或組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)。用膠原酶消化為好，它對結締組織有較強消化作用，對表皮細胞損傷小，但成纖維細胞易與上皮細胞同時生長，在這種情況下，需做排除成纖維胞處理。血清中含有血小板來源的生長因子（PDGF），易促成纖維細胞的生長；如用好的、不含PDGF的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)可能更好。
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注意事項
冷消化目的在于使表皮和結合松散，如冷消化后分離下來的表皮膜自身也已松散，此時亦可直接置入PBS中用吸管吹打制備細胞懸液；不再經過第二次消化。
其他
皮膚表皮培養(yǎng)亦可用全皮消化法或組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)。用膠原酶消化為好，它對結締組織有較強消化作用，對表皮細胞損傷小，但成纖維細胞易與上皮細胞同時生長，在這種情況下，需做排除成纖維胞處理。血清中含有血小板來源的生長因子（PDGF），易促成纖維細胞的生長；如用好的、不含PDGF的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)可能更好。