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16HBE 人支氣管上皮細胞

閱讀:277          發布時間:2018-8-6
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16HBE 人支氣管上皮細胞 使用說明書
支氣管上 皮 貼壁
所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護
培養基:美國sciencell 角質細胞培養基,貨號: 2101
溫度:37℃
氣相:95%空氣,5%二氧化碳
收到細胞后,請對細胞培養瓶外表進行消毒,將細胞置于培養箱中進行 1-2 小時的緩沖,待細胞恢復基本生長狀態后,進行后續細胞實驗。
在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:
(一)細胞未長至 85%時,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,若培養瓶上無特殊標注,吸去剩余培養液,只留 6-8ml 培養液繼續培養。
(二)細胞已長滿(達 85-95%)。即可進行傳代,具體步驟如下:
1.棄去培養液,用 PBS 洗滌 1-2 次,
2.加入 1.0ml 胰酶消化液,37℃消化,顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞回縮變圓、透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落,則迅速拿回操作臺,加入雙倍的含 10%血清的*培養液,終止消化并輕輕吹打細胞,使其變成單細胞懸液,
3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min,棄上清,輕彈管底,將細胞彈散,
4.加入新鮮培養液重懸細胞,進行傳代、凍存,
5.如果沒有特別說明,建議收到細胞后的次傳代比例為 1:2。
注:1.觀察細胞密度用(4X 物鏡)低倍鏡觀
察,以便正確的判斷細胞密度;觀察細胞形態請用
(10X 或 20X)高倍鏡觀察;
2.瓶中運輸的培養液不能重復使用,請換新鮮培養液培養;
3.有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心重懸后接種到新瓶內;
4.收到細胞后,若發現培養瓶破損、漏液及細胞污染,請及時與我們聯系。
凍存條件:70%基礎培養液+20%胎牛血清
+10%DMSO
保存條件:液氮存儲

經供研究之用
1.培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。
2.細胞漂浮:培養瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2 小時后觀察, 如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留 8-10ml 培養液培養觀察,細胞生長至匯合度 85-95%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁, 將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。

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