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HPV16-GFP假病毒說明書
閱讀：512 發布時間：2022-3-20HPV16-GFP假病毒說明書
【產品名稱】
通用名稱：HPV假病毒
【預期用途】
用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測。
【檢驗原理】
中和抗體在體外與假病毒中和，使得假病毒喪失感染細胞的能力，進入細胞的假病毒會表達EGFP等蛋白，通過Elispot讀板儀掃描并計數每孔熒光斑點數，通過與假病毒對照組熒光斑點數比較，計算其抑制百分比，通過計算公式可以計算出當假病毒50%被抑制時抗體的稀釋倍數，來計算其ID50,用ID50來表示抗體對假病毒中和活性大小。
【主要組成成分】
HPV假病毒顆粒，L1和L2蛋白以及報告基因，自折疊成HPV假病毒顆粒
【儲存條件及有效期】
-80℃ 密封貯存。。
避免反復凍融。
生產日期及有效期詳見標簽。
【樣本要求】HPV16-GFP假病毒說明書
樣本為HPV假病毒，可在體內復制一輪，操作時需在無菌條件下操作。
【檢驗方法】
1 預先4-8小時鋪293FT細胞于96孔板，每孔細胞數為1.5×104 ，置于37℃、 5% CO2孵箱中培養。
2 加樣順序
2.1 40倍初始稀釋：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入152μl DMEM培養基，其余各孔中加入120μl DMEM培養基。于B4- B11孔中加入血清樣品8μl/孔，每樣品兩復孔。
2.2 10倍初始稀釋：取96孔U型板，于B4- B11孔中各加入128μl DMEM培養基，其余各孔中加入120μl DMEM培養基。于B4- B11孔中加入血清樣品32μl/孔，每樣品兩復孔。
加樣順序表HPV16-GFP假病毒說明書
樣品1 | 樣品2 | 樣品3 | 樣品4 | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
A | ||||||||||||
B | 細胞對照（培養基） | 病毒對照（假病毒+培養基） | ||||||||||
C | ||||||||||||
D | ||||||||||||
E | ||||||||||||
F | ||||||||||||
G | ||||||||||||
H | ||||||||||||
3樣品稀釋：將多道電動移液器調至40μl移液和100μl混勻程序，對B4- B11孔中液體輕柔的反復吹吸8次充分混勻，然后轉移40μl液體至對應的C4- C11孔，輕柔的反復吹吸8次后轉移至D4-D11孔，以此類推，從G4-G11孔中吸棄40μl液體。
5.2.4 用DMEM培養基將假病毒稀釋至200TCID50，于第B3-G11孔，每孔加120μl。
5.2.5將稀釋板4℃ 放至1小時。
5.2.6 從稀釋板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物（或培養基）貼壁緩緩加入預先已鋪好細胞的培養板對應孔中，輕拍培養板四周混勻。
5.2.7 將細胞培養板置于37℃、5% CO2的孵箱中培養60-96小時。
5.2.8 ELISPOT讀板儀進行檢測，計算感染抑制率（%）=1-（樣本檢測值-細胞對照值）/（病毒對照值-細胞對照值）×100%。
5.2.9 計算ID50。
【陽性判斷值】
中和實驗過程中需要設置陰性對照，陽性對照，作為參照，來判斷實驗是否成立，陰性對照ID50小于30，陽性ID50大于30作為判斷值
【產品性能指標】
1. 外觀
外觀應滿足如下要求：
1.1包裝完整，無破損；外觀應整潔，文字符號標識清晰；
【注意事項】
1. 本產品僅供中和抗體體外檢測。
2. 減少反復凍融
3. 流水或者4℃融化使用。
4. 無菌操作。
5. 本產品不能重復使用。
HPV16-GFP假病毒說明書