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RCA滾環擴增試劑盒使用說明
閱讀：985 發布時間：2021-5-19RCA滾環擴增試劑盒
(Rolling Circle Amplification Kit)
Cat. No.: A3702 Size: 100T Store at:-20℃
描述：滾環擴增（rolling circle amplification，RCA）是新近發展起來的一種恒溫核酸擴增方法。以環狀 DNA 為模板， 通過一個短的 DNA 引物（與部分環狀模板互補），在 phi29 DNA 聚合酶催化下將dNTPs 轉變成單鏈DNA，此單鏈DNA包含成百上千個重復的模板互補片段。這種方法不僅可以直接擴增 DNA 和 RNA，還可以實現對靶核酸的信號放大，靈敏度達到一個拷貝的核酸分子，因此在核酸檢測中具有很大的應用價值和潛力。本試劑盒配置的 phi29 DNA 聚合酶具有鏈置換和連續合成特性，可連續合成長達70kb 的DNA 片段。另外，該酶具有 3’→5’外切酶校讀功能，合成的 DNA 片段保真性高。試劑盒配備的 Random Hexamers 為 6 堿基隨機引物可對目標分子進行指數放大（通常放大 10000 倍）。組分
名稱 | 100T |
phi29 DNA Polymerase (20 U/μl) | 50 μl |
10×phi29 Buffer | 1 ml |
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl) | 25 μl |
10mM dNTP Mixture | 200 μl |
25XRandom Hexamer | 100 μl |
儲存：-20℃可保存 3 年。
操方法
1. 配置反應液
10×phi29 Buffer 2.5 μl 10mM dNTP Mixture 2 μl
25XRandom Hexamers 1 μl
模板 DNA 0.01-20 ng
ddH2O up to 25 μl
2. 變性退火
將上述產物置于 PCR 上，93°C 變性 3min，25°C 5min。
- 向上述退火產物中加入 0.5μl phi29 DNA Polymerase 和0.2μl Yeast Pyrophosphatase，混合均勻后放置到 30°C 反應 2~16h（根據所需的產物量進行反應時間調整，通常分別在 2h、5h、16h 進行電泳確認）。
4. 反應結束后 65°C 10min 進行失活反應。
注意：
RCA 擴增還可應用于其它缺刻或診斷相應的實驗， 此時
Random Hexamer 為非
注意：本產品僅供研究用，請勿用于人體及動物的治療、臨床診斷或作為食品、化妝品、家庭用品的添加劑等用途。