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人單純皰疹病毒 I 型熒光定量 PCR 檢測試劑盒（染料法）
閱讀：413 發布時間：2019-9-25產品及特點 單純皰疹病毒（Herpes Simple Viruses， HSV）屬于皰疹病毒科 a 病毒亞科，
為雙股 DNA 病毒，皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動物。對人
的感染通過人與人接觸傳染。根據抗原性的差別目前把 HSV 分為 1 型和 2 型。1 型主
要由口唇病灶獲得，2 型可從生殖器病灶分離到。從發生后四個月到數年被感染的人數
可達人口總數的 50-90%，是易感染人的一種病毒。因此對 HSV-1 的快速診斷具有
重要的意義。本產品就是根據 HSV-1 保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR
產品。本試劑盒具有下列特點：
1. 根據 HSV-1 的 gD 基因設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
2. 靈敏度比常規 PCR 高 2-3 個數量級，可以達到幾百拷貝/反應。
3. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
規格及成分 成分 編號 十孔盒包裝（去紙托）
2×qPCR MagicMix 90408 1 mL（棕色，裝 A 袋）
超純水 100935 1 mL（紅蓋，裝 A 袋）
引物 11-180802F 11-180802f 1 OD（本色，裝 B 袋）
引物 11-180802R 11-180802r 1 OD（本色，裝 B 袋）
HSV-1 陽性對照
(1×10E8 copy/μL)
11-180802pc 50 μL（白蓋，裝 C 袋）
DNA 病毒裂解液（試用裝） 3674a 15 次（9 mL）
使用手冊 11-180802sc 1 份
運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準備區、C 袋的陽性對照分開放置)，
有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。本 試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）
二、引物的制備（在樣品制備室進行）
2. 按引物標簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上
的標簽），使得兩條引物的濃度均為 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，標注為引物混合物，放冰上待用。220μL 足夠 100 次 qPCR 反應。
三、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，
因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照， 只提供可以直接使用的長為 52bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
3. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
5. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得
1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得
1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
9. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。 三、設置 qPCR 反應（20 μL 體系，在樣品制備室進行）
10. 在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復，下表只列出一次。樣品管 和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲存好后后加）：
成分 樣品 陰性對照 陽性對照（2-7 管）
2×qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL
引物混合物 2 μL 2 μL 各 2 μL
自備 10×ROX (見注) 2 μL 2 μL 各 2 μL
待測樣品 DNA 模板 1-5 μL 不加 不加
陽性對照（2-7 號）
不加
不加 各 5μL（2 號樣到
2 號管，3 號樣到 3 號管…）
補水到 20 μL 20 μL 20 μL
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照，其他熒光 PCR 儀