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幼蟲芽孢桿菌 PCR 試劑盒
閱讀：192 發布時間：2019-9-10產品及特點 幼蟲芽孢桿菌（Bacillus larvae）是引起美洲蜂幼蟲腐臭病（American
foul brood）的病原。美洲蜂幼蟲腐臭病又名爛子病，是蜜蜂幼蟲和蛹的一種
細菌性、急性、毀滅性病害。特征為病蜂的蜂蓋子脾下陷、穿孔、封蓋幼蟲死
亡、蛹蟲現象等。美洲蜂幼蟲腐臭病初發生于英國，以后傳到歐美各國，截
止至 2011 年*均有發生。美洲蜂幼蟲腐臭病不但危害性大，而且一旦發
生就很難*。輕者影響蜂群繁殖和采集力，重者造成蜂群的覆滅，因此幼蟲
芽孢桿菌快速檢測具有重要的意義。本試劑盒根據 PCR 原理開發，它具有下列
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供細菌 DNA 模板。
2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增幼蟲芽孢桿菌，跟其他微生物無交
叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。
6. 本產品只能用于科研。
規格及成分 成 份 編號 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL（紅蓋）
超純水 100935 1 mL（亮黃蓋）
幼蟲芽孢桿菌 PCR 引物混合液 13-25440yw 100 μL（白蓋）
幼蟲芽孢桿菌 PCR 陽性對照
（1×10E8 拷貝/μL）
13-25440pc 50 μL（黃蓋）
天凈沙核酸釋放劑試用裝 61202 20 次（1mL、綠蓋）
使用手冊 13-25440sc 1 份
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其
他試劑。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽
性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL 陽性對照的10000
倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作
為 PC。另外用水作為 NC。
2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數細菌 DNA 提取試
劑盒兼容。也可以選購本公司的細菌 DNAout 或柱式細菌 DNAout。本試
劑盒免費贈送 20 次免 DNA 提取的天凈沙核酸釋放劑，本產品的裂解液可
以直接作為 PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。
二、設置 PCR 反應（40 μL 體系）
3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性
對照，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：
成分
N+2 個
樣品管
PCR 陰性
對照
PCR 陽性
對照
PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
幼蟲芽孢桿菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2 個樣品 DNA 模板 各 18 μL - -
樣品制備陰性對照（超純水） - 18 μL -
樣品制備陽性對照（幼蟲芽孢桿
菌陽性對照的 1000 倍稀釋液） - - 18 μL
4. 按下表設置 PCR 反應：
過程 溫度 時間
預變性 94℃ 5 min
PCR 反應
（35 個循環）
94℃ 15 sec
58℃ 15 sec
72℃ 30 sec
后延伸 72℃ 10 min
三、電泳檢測
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix
在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預期的 PCR
產物長度為 1106bp。陽性對照必須有此條帶出現，陰性對照必須無任何
擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR
擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
關聯產品 幼蟲芽孢桿菌可視化 LAMP 擴增試劑盒