規格：100管/96樣

植物葉綠素（chlorophyll）含量試劑盒說明書

 

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。測定意義

植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養狀況密切相關，是反應植物生長狀況的重要指標。

測定原理

葉綠素 a 和葉綠素 b 在 645nm 和 663nm 處有大吸收，根據經驗公式可計算得葉綠素 a 和葉綠素 b 以及總葉綠素含量。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、10mL 玻璃試管，錫箔紙。

試劑組成和配制

提取液：液體 1000mL×1瓶，4℃保存。（自備，無水乙醇：丙酮=1:2）。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存。

測定操作，微板法植物葉綠素（chlorophyll）試劑盒說明書

1. 稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約 0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。

2. 加入 1mL 蒸餾水，少量試劑一（約 50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉入 10mL玻璃試管。

3. 用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉入玻璃試管，用提取液補充至 10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提 3h，觀察試管底部組織殘渣*變白則提取*，若組織殘渣未*變白，繼續浸提至其*變白。

4. 取浸提液 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板，提取液調零，測定 663nm 和 645nm 處吸光值，分別記為A663 和A645 。

計算公式

微量石英比色皿計算方法：微板法植物葉綠素（chlorophyll）試劑盒說明書

葉綠素a含量（mg/g）=（12.7× A₆₆₃-2.69×A₆₄₅）×V 提×D÷m÷1000

= 0.01×（12.7×A₆₆₃-2.69×A₆₄₅）×D÷m

葉綠素b含量（mg/g）=（22.9×A₆₄₅-4.68×A₆₆₃）×V 提×D÷m÷1000

= 0.01×（22.9×A₆₄₅-4.68×A₆₆₃）×D÷m

葉綠素總含量（mg/g）=（20.21×A₆₄₅+8.02×A₆₆₃）×V 提×D÷m÷1000

= 0.01×（20.21×A₆₄₅+8.02×A₆₆₃）×D÷m

V 提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數；m：樣本質量，g

 

96孔板計算方法：

葉綠素a含量（mg/g）=2×（12.7× A₆₆₃-2.69×A₆₄₅）×V 提×D÷m÷1000

= 0.02×（12.7×A₆₆₃-2.69×A₆₄₅）×D÷m

葉綠素b含量（mg/g）=2×（22.9×A₆₄₅-4.68×A₆₆₃）×V 提×D÷m÷1000

= 0.02×（22.9×A₆₄₅-4.68×A₆₆₃）×D÷m

葉綠素總含量（mg/g）=2×（20.21×A₆₄₅+8.02×A₆₆₃）×V 提×D÷m÷1000

= 0.02×（20.21×A₆₄₅+8.02×A₆₆₃）×D÷m

V 提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數；m：樣本質量，g

注意事項

1. 色素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進行。

2. 一定要浸提至組織殘渣*變白，否則提取不充分。

3. 用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質被轉移至玻璃試管。

4. 測定時吸光值超過 1，可進行適當稀釋。

微板法植物葉綠素（chlorophyll）試劑盒說明書