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Bend.3；小鼠腦微血管內皮細胞
閱讀：690 發布時間：2019-5-171、細胞名稱：Bend.3；小鼠腦微血管內皮細胞
2、生長特性： 貼壁 □ 懸浮 □半懸浮半貼壁
3、細胞生長條件：
培養條件 DMEM(高糖）+10%FBS+1%雙抗
溫度 37℃
空氣條件 5% CO2，,95% AIR
傳代方法 建議1:2傳代，2~3天換液
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
4、背景資料：該細胞轉染了NTKmT逆轉錄病毒載體，表達多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標記的低密度脂蛋白（LDL）證實了該細胞株的內皮細胞特性。細胞因子和脂多糖（LPS）可誘導細胞分泌MAdCAM-1和E選擇素。TNF-α、IL-1和LPS的誘導是時間和濃度依賴。早代數的未刺激細胞會分泌MAdCAM-1和VCAM-1，但找過30代不分泌。細胞會組成型分泌ICAM-1，并且表達量會在LPS、IL-1和TNF-α刺激下增多。P選擇素在早代數和晚代數細胞中受TNF-α誘導分泌，但30代后分泌量增加。
二．使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。