規格：100管/96樣
植物木質素（Lignin）分光光度法含量試劑盒說明書
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
木質素是構成植物細胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇構成的一類物質，存在于木質組織中，主要作用是通過形成交織網來硬化細胞壁。木質素主要位于纖維素纖維之間，起抗壓作
用。
測定原理
木質素中的酚羥基發生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低與木質素含量正相關。
需自備的儀器和用品
天平、40 目篩，玻璃試管、燒杯、離心機，恒溫水浴鍋、烘箱、封口膜、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、高氯酸。
植物木質素（Lignin）分光光度法試劑盒試劑組成和配制
試劑一：液體 50mL×2 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 50mL×2 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 100mL×2 瓶，4℃保存。
樣品處理
樣品 80℃烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩，稱取約 5mg（記為 W）于 10mL 玻璃試管中（務*玻璃試管，不可用 Ep 管）
測定操作表

	空白管	測定管
樣本（mg）		5
試劑一（μL）	1000	1000
高氯酸（μL）	40	40
于 10mL 玻璃試管中，用封口膜密封，充分混勻，80℃水浴 40min，每隔 10min 震 蕩一次，然后自然冷卻
試劑二（μL）	1000	1000
充分混勻
上清（μL）	40	40
試劑三（μL）	1960（參照注意事項四）	1960（參照注意事項四）
取 200ul 于微量石英比色皿或者96孔板，測定 280nm處吸光值 A。分別記為 A 空白管和 A 測定管，ΔA=A 測定管-A 空白管

植物木質素（Lignin）分光光度法試劑盒計算公式
用微量石英比色皿計算公式如下：
標準曲線：y = 0.02776x+0.0068，R² =0.9889
Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反總×10 ^-3 ÷W×T
=0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T
V 反總：反應總體積：2.04mL；W：樣本質量，g；T：稀釋倍數
 

用 96 孔板計算公式如下：

標準曲線：y = 0.01388x+0.0034，R² =0.9889
Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0034)÷0.01388×V 反總×10 ^-3 ÷W×T
=0.1470×(ΔA-0.0034) ÷W×T
V 反總：反應總體積：2.04mL；W：樣本質量，g；T：稀釋倍數
注意事項
1. 試劑一有毒性，請操作時做好防護措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。
2. 加熱過程中有劇烈反應，震蕩時輕搖，以免壓力過大噴出造成人生傷害。
3. 試劑三具有強刺激性，建議操作過程全部在通風櫥子操作。
4. 取上清加試劑三步驟根據自己樣品乙酰化程度，試劑三的用量可調整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計算。
5.乙酰化測定木質素含量如受到實驗環境的影響，可自行制作標準曲線。
植物木質素（Lignin）分光光度法試劑盒