化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
大鼠神經(jīng)元細(xì)胞的分離和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
閱讀：552 發(fā)布時間：2018-12-13實(shí)驗(yàn)材料 母鼠
試劑、試劑盒 BSS
儀器、耗材 無菌器械顯微鏡
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 殺死懷孕 18 天母鼠（常用過量 CO2 使其窒息），用無菌器械取出胚胎，放在無菌的培養(yǎng)皿中。
2. 取下胚胎的頭，放在盛有 4 ml 不含 Ca2+ 和 Mg2+ 的平衡鹽溶液（BSS）的培養(yǎng)皿中。
3. 從頭顱骨上取下腦，放在 35 mm 培養(yǎng)皿中的 BSS 液滴上，培養(yǎng)皿中半裝滿 Paraplast（Sigma）。
4. 在顯微鏡下剝離腦膜，取下海馬體，放在裝有 BSS 的 35 mm 培養(yǎng)皿中。
5. 海馬體在新鮮配制的 0.25% 胰酶 BSS 溶液中 37℃ 孵育 15 分鐘。
6. 小心吸掉胰酶溶液，加入 5 ml BSS，層流柜中室溫放置 5 分鐘。重復(fù)此步兩次或更多次，后加入 2 ml BSS。
7. 首先用普通巴斯德吸管分離細(xì)胞，然后換用一支用火燒平、內(nèi)徑縮小一半的吸管。
8. 計(jì)數(shù)細(xì)胞，確定細(xì)胞密度。
9. 所需數(shù)目的細(xì)胞懸浮于接種培養(yǎng)基中，接種培養(yǎng)皿中 poly-L-lysine 預(yù)處理的蓋玻片。如果用于生化實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞直接接種 poly-L-lysine 處理的培養(yǎng)皿。
10. 2~4 小時后，蓋玻片轉(zhuǎn)移至含有單層神經(jīng)膠質(zhì)的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿中是維持培養(yǎng)基。
11. 每周更換 3 ml 培養(yǎng)液。